詳細介紹
細胞名稱 人急性單核細胞白血病細胞;THP-1培養
形態特性 淋巴母細胞樣
品牌 懸浮生長
特征特性 該細胞從一名1歲的患有急性單核細胞性白血病的男孩的外周血中分離建立。該細胞可以吞噬乳膠顆粒和激活的紅細胞,細胞膜和胞漿內均沒有免疫球蛋白,表達C3R和FcR;可受佛波酯TPA誘導向單核系方向分化;可作為轉染宿主。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C54
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR STR鑒定
同工酶
染色體
使用權限 A類
人急性單核細胞白血病細胞;THP-1培養貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養瓶內,加入*培養基后繼續培養或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線
Anti-VEGFR-3/FLt-4 /FITC 熒光素標記血管內皮細胞生長因子受體-3IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
C-erbB-4/HER4/erbB-4 (epidermal growth factor receptor4) c-erbB-4癌基因抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
CD68抗體(人、) Anti-CD68 0.1ml
SLC25A6 英文名稱: 線粒體載體腺嘌呤核苷酸轉運蛋白6抗體 0.2ml
ETFDH 英文名稱: 電子轉移黃素蛋白脫氫酶抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-GATA-4(ser 262) 磷酸化GATA結合蛋白4抗體 規格 0.1ml
C-erbB-4/HER4/erbB-4 (epidermal growth factor receptor4) c-erbB-4癌基因抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
SP-A ELISA Kit 大鼠肺表面活性物質相關蛋白AMulti-class antibodies規格: 48T
Anti-Urocortin 3 尿皮質素UCN3抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh GCP-2 粒細胞趨化蛋白2抗體 規格 0.1ml
EM-2(Human endomorphin-2) ELISA Kit 人內肽-2 96T
Nanos3 英文名稱: 骨巢蛋白抗體 0.2ml
Alpha 2 antiplasmin 英文名稱: α2纖溶酶色素上皮衍生因子抗體 0.2ml
Anti-Urocortin 3 尿皮質素UCN3抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml
TSP-1 ELISA Kit 大鼠血小板反應蛋白/凝血酶敏感蛋白1 96T
Nkx2.5 英文名稱: 心臟特異性同源盒轉錄因子NKX2.5抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh GLCNE GLCNE蛋白抗體 規格 0.2ml
PA-IgG/M/A ELISA Kit 大鼠抗血小板抗體IgG/M/AMulti-class antibodies規格: 48T
ATP7A 英文名稱: 銅轉運蛋白質α鏈抗體 0.1ml
Anti-TRADD 死亡區的壞死因子受體1相關蛋白抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Anti-DEC-205/CD205/Ly75/FITC 熒光素標記CD205抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Anti-MAP-2/FITC 熒光素標記微管相關蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Calmodulin/CaM I 鈣調節素抗體(鈣調蛋白/鈣調素) 規格 0.1ml
Anti-CSP (circumsporozoite protein/Plasmodium yoelii) 環子孢子蛋白(約氏瘧原蟲)抗原 0.5mg
HSD3B7 英文名稱: 滋養層細胞抗原3β7抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh SERPINB10 絲氨酸蛋白酶抑制劑B10抗體 規格 0.2ml
Anti-MAP-2/FITC 熒光素標記微管相關蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。