詳細介紹
細胞名稱 人子宮頸鱗狀細胞癌細胞;SiHa培養
形態特性 上皮細胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細胞來源于一位日本病人的手術切除的腫瘤組織。電鏡下可以看到細胞間典型的橋粒和細胞質中大量的張力絲。1975年發現有支原體污染,而后被去除。該細胞整合有HPV16基因組,每個細胞中有1~2個拷貝。
培養條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C36
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR STR鑒定
同工酶
染色體
使用權限 A類
人子宮頸鱗狀細胞癌細胞;SiHa培養貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養瓶內,加入*培養基后繼續培養或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線
Anti-TIMP-1/FITC 熒光素標記金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
phospho-BAD(pSer128) 磷酸化相關死亡促進因子抗體Multi-class antibodies規格: 0.5mg
非受體型酪氨酸蛋白激酶抗體 Anti-SYK 0.1ml
STK38 英文名稱: 絲酸/蘇酸蛋白激酶38抗體 0.2ml
ET-1 英文名稱: 內皮素1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-LSP1 (Ser204) 磷酸化白細胞F肌動蛋白結合蛋白抗體 規格 0.1ml
phospho-BAD(pSer128) 磷酸化相關死亡促進因子抗體Multi-class antibodies規格: 0.5mg
SP-C(Human Pulmonary surfatcant-associated protein C) ELISA Kit 人肺表面活性物質相關蛋白CMulti-class antibodies規格: 48T
Anti-HPV18 E6 人類狀瘤病毒18 E6抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh MCG10 RNA相關結合蛋白MCG10抗體 規格 0.2ml
ILK-1(Human integrin-linked kinase 1) ELISA Kit 人整合素連接激酶1 96T
RHCG 英文名稱: RH血型C糖蛋白抗體 0.2ml
Collagen I 英文名稱: Ⅰ型膠原/1型膠原a1抗體 0.1ml
Anti-HPV18 E6 人類狀瘤病毒18 E6抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml
T-TM(Human thrombinthrombomodulin compound) ELISA Kit 人凝血酶血栓調節蛋白復合物 96T
FHOD3 英文名稱: FHOD3蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh NADE/NGFRAP1 神經生長因子受體相關蛋白1抗體 規格 0.2ml
Ret MMP-9 大鼠血清金屬基質蛋白酶-9Multi-class antibodies規格: 48T
CCR6 英文名稱: 細胞表面趨化因子受體6抗體 0.1ml
Anti-EAAT3 膠質細胞谷氨酸運載蛋白3抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
ACA/CENP(Human Anticentromere Antibody) ELISA Kit 人抗著絲點抗體Multi-class antibodies規格: 48T
Anti-Phospho-PLC gamma 2 (Tyr759) 磷酸化磷酯酶Cγ2抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh HHV8/ORF50 人類皰疹病毒8抗體 規格 0.2ml
ANP(Mouse Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit 小鼠心鈉肽 96T
PHD1 英文名稱: 脯酰羥化酶抗體 0.1ml
Casein Kappa 英文名稱: K-酪蛋白抗體 0.1ml
Anti-Phospho-PLC gamma 2 (Tyr759) 磷酸化磷酯酶Cγ2抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。