詳細介紹
細胞名稱 人永生化表皮細胞;HaCaT培養
形態特性 上皮細胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細胞源自一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚,角蛋白、角化細胞交聯外膜蛋白、中間絲相關蛋白陽性。
培養條件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 15%FBS
傳代方法 1:10~1:20傳代,每周換液2~3次
傳代情況 C2
凍存條件 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:9,11;D13S317:10,12;D16S539:9,12;D18S51:12;D19S433:13,14;D21S11:30.2;D2S1338:17,25;D3S1358:16;D5S818:12;D7S820:9,11;D8S1179:14;FGA:24;TH01:9.3;TPOX:11,12;vWA:16,17,OL;
同工酶
染色體 72~88
使用權限 A類
人永生化表皮細胞;HaCaT培養貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養瓶內,加入*培養基后繼續培養或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線
PROG ELISA kit 大鼠孕激素/孕酮Multi-class antibodies規格: 48T
Anti-ARHI/FITC 熒光素標記ARHI蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FAM13B1 FAM13B1蛋白抗體 規格 0.2ml
CaN ELISA Kit 大鼠鈣調磷酸酶 96T
5 MethylCytosine 英文名稱: 5甲基胞嘧啶抗體 0.1ml
phospho-Androgen Receptor (Ser791) 英文名稱: 磷酸化雄激素受體抗體 0.1ml
Anti-ARHI/FITC 熒光素標記ARHI蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
ZO-1 peptide 胞質緊密粘連蛋白1抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
Anti-Phospho-Beta-Catenin (Ser33/37) 磷酸化β 連環素蛋白抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh PCDHGB4 原鈣粘蛋白γB4抗體 規格 0.2ml
IL1R1 Kit Human 人 IL1R1 / CD121a ELISA配對抗體 ELISA
THRB1 英文名稱: 甲狀腺激素受體β抗體(THβ1,THβ2) 0.2ml
Phospho-cdc2 (Thr14) 英文名稱: 磷酸化周期素依賴激酶2抗體 0.1ml
Anti-Phospho-Beta-Catenin (Ser33/37) 磷酸化β 連環素蛋白抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
人脂質運載蛋白1 (Lipocalin-1) ELISA試劑盒人96T0.625-40 ng/mL大鼠煙堿型乙酰膽堿受體(N-AChR)ELISA試劑盒,英文名:N-AChR ELISA KiISA Kit for Human Ras-related protein Rab-19大鼠5羥基吲哚乙酸(5-HIAA)ELISA試劑盒,英文名:5-HIAA ELISA KiISA Kit for Human C-Jun-amino-terminal kinase-interacting protein 4大鼠亞鐵螯合酶(FECH)ELISA試劑盒,英文名:FECH ELISA KiISA Kit for Human Scavenger receptor class B member 1大鼠生長調節致基因β(GROβ)ELISA試劑盒,英文名:GROβ ELISA KiISA Kit for Human TN-C大鼠醌NADH脫氫酶1(NQO1)ELISA試劑盒,英文名:NQO1 ELISA KiISA Kit for Human Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 2大鼠干擾素β(IFNβ)ELISA試劑盒,英文名:IFNβ ELISA KiISA Kit for Human Vitamin K epoxide reductase complex subunit 1大鼠半乳糖凝集素9(GAL9)ELISA試劑盒,英文名:GAL9 ELISA Kit
人Myoferlin蛋白(Myoferlin)ELISA試劑盒人96T0.625-40 ng/mL大鼠天冬氨酸氨基轉移酶(AST)ELISA試劑盒,英文名:AST ELISA Kit大鼠Ⅲ型前膠原(PCⅢ)ELISA試劑盒,英文名:PCⅢ ELISA KiISA Kit for Human A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 6小鼠脂聯素(ADP)ELISA試劑盒,英文名:ADP ELISA KiISA Kit for Human Aggrecan core protein小鼠細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒,英文名:ICAM-1/CD54 ELISA KiISA Kit for Human Apolipoprotein C-I小鼠凝血因子VIIIa輕鏈(F8aLC)ELISA試劑盒,英文名:F8aLC ELISA KiISA Kit for Human Cocaine esterase小鼠甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒,英文名:T4 ELISA KiISA Kit for Human C-C chemokine receptor type 6小鼠膽囊收素(CCK)ELISA試劑盒,英文名:CCK ELISA Kit
胰蛋白酶工作液(水劑、中度消化) 10ml pH 7.8, 0.05%,免疫組化用
VCAM-1 英文名稱: 血管內皮細胞粘附分子抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-BTK/BPK(Tyr223) 磷酸化蛋白酪氨酸激酶ATK抗體 規格 0.1ml
Integrin alpha E2 peptide 整合素alpha E2抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
DENND2D 英文名稱: DENN域內含蛋白2D抗體 0.2ml
Anti-phospho-APS(Ser598) 磷酸化APS抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
sLR(Mouse Leptin Soluble Receptor) ELISA Kit 小鼠可溶性瘦素受體Multi-class antibodies規格: 48T
Anti-Phospho-Caspase-9 (Pry153) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化白介素1-β轉化酶樣凋亡蛋白酶6抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ELL 聚合酶延伸因子抗體 規格 0.2ml
(P I NP)ELISA Kit 大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽 96T
MASP2 英文名稱: 甘露聚糖結合凝集素絲酸肽酶2抗體 0.1ml
phospho-AMPK alpha-1 (Thr172) 英文名稱: 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體 0.1ml
Anti-Phospho-Caspase-9 (Pry153) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化白介素1-β轉化酶樣凋亡蛋白酶6抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。