儀器設(shè)備與器具:
1 恒溫培養(yǎng)箱:36±1℃。
2 1000ml三角燒瓶、1ml、10ml移液管。
3 接種針。
4 顯微鏡。
5 超凈工作臺(tái)。
6 玻片、酒精燈、洗耳球、試管架。
7 天平:感量0.01g。
8 滅菌釜。
9 培養(yǎng)皿(直徑為90mm)、試管,經(jīng)121℃、30分鐘滅菌。
10試管夾、酒精燈、秒表、載玻片
基本概念:
(1)菌群:由多種細(xì)菌混合組成的相對(duì)穩(wěn)定的細(xì)菌群體,具有某些共同性狀。如大腸菌群包括大腸桿菌、產(chǎn)氣腸細(xì)菌及他們之間的過(guò)渡類(lèi)型。
(2) 菌屬:菌種的上一級(jí)分類(lèi),通常性狀相近、親緣關(guān)系密切的若干菌種組成一個(gè)菌屬,如芽孢桿菌屬、葡萄球菌屬、乳桿菌屬等。
(3)是細(xì)菌最基本的分類(lèi)單位,通常指表型特征相似、親緣關(guān)系接近的一類(lèi)細(xì)菌群體,與同屬內(nèi)其他種有著明顯差異;當(dāng)涉及到細(xì)菌保存時(shí),菌種是指細(xì)菌的種子(用來(lái)長(zhǎng)期保存)資源。
(4) 菌型:同一菌種的不同細(xì)菌,在某些方面存在較小差異的為同一菌型,通常一個(gè)菌種內(nèi)的細(xì)菌可以分為多種不同的菌型。
(5) 菌株:由一個(gè)獨(dú)立分離的單細(xì)胞系培養(yǎng)而成的純遺傳型群體及其一切后代,一種微生物的每一個(gè)不同來(lái)源的純培養(yǎng)物均可稱(chēng)為該菌種的一個(gè)菌株。
培養(yǎng)及打管說(shuō)明:
1、安瓿瓶開(kāi)封:用浸過(guò)75%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管,用火焰加熱其頂端,滴少量無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂,用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。
2、菌株恢復(fù)培養(yǎng):用無(wú)菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基,滴入安瓿管內(nèi),輕輕振蕩,使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液,移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中,并在建議的條件下培養(yǎng)。
3、注意事項(xiàng):菌種活化前,請(qǐng)將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下,某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后,延遲期較長(zhǎng),需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)
4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。
5、暫不啟開(kāi)的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。
Phospho-RSK2(Tyr529) 磷化核糖體S6激RSK2抗體 規(guī)格: 0.1ml
GPCR TAS1R3 G偶聯(lián)受體TAS1R3抗體 規(guī)格: 0.2ml
PRUNE/DRES17 相關(guān)DRES17抗體 規(guī)格: 0.2ml
CXCL4/PF4 小板因子4抗體 規(guī)格: 0.1ml
DIAPH1 耳聾常染色體顯性遺傳相關(guān)1抗體 規(guī)格: 0.2ml
ZHX2/Alpha fetoprotein regulator 1 甲胎調(diào)節(jié)1抗體 規(guī)格: 0.2ml
PBR/DBI/TSPO 外周二氮受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
FLG 絲聚合/中間絲抗體 規(guī)格: 0.1mlhuman Fibrinogen 羊抗人纖維原抗體 0.1ml
DPV(Duck plague virus) 鴨瘟病毒DPV抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-HOMER3(Thr36) 磷化HOMER3抗體 規(guī)格: 0.1ml
EphA3/Eph receptor A3 激受體A3抗體 規(guī)格: 0.2ml
金頂側(cè)耳、榆黃磨、金頂磨規(guī)格CABLES2 細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激CABLES2抗體 規(guī)格: 0.2mlGentamicin 慶大抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Bov IgG/PE PE標(biāo)記的兔抗牛IgG 規(guī)格: 0.1mlPhospho-PLC gamma 1(Ser1248) 磷酸化磷酯Cγ1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Integrin beta 6 整合素β6抗體(Integrin β6) 0.2mlAdenylate Kinase 1/AK1 苷酸激-1抗體 規(guī)格: 0.2ml
LAMP-3/DC-LAMP/CD208 溶體相關(guān)膜蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-HER3(Tyr1328) 磷酸化HER3受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Exendin 4 GLP1類(lèi)似蛋白Exendin4抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-LSP1 (Ser204) 磷酸化白細(xì)胞F肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Goat Anti-Bovine IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1mlCR1/CD35 Ⅰ型補(bǔ)體受體抗體(C3b/C4b受體抗體) 規(guī)格: 0.1ml
KLHL36/C16orf44 Kelch樣蛋白36抗體 規(guī)格: 0.2mlCASC5 瘤易感性候選基因5抗體 規(guī)格: 0.2ml
GABRA1 G1氨基丁酸A型受體α1抗體 規(guī)格: 0.1mlTIMP-2 金屬組織抑制因子-2抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-APE(Ser1417) 磷酸化肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體 規(guī)格: 0.1mlDC-SIGN/CD209 細(xì)胞間粘附分子非整合素蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-rat IgM/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗大鼠IgM 規(guī)格: 0.1mlPLGLB2 纖溶相關(guān)蛋白B2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Cdc7 細(xì)胞分裂周期蛋白7抗體 規(guī)格: 0.1mlAKT3 蛋白激B3 規(guī)格: 0.1ml
HSPBAP1 熱休克蛋白27相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlGRM2/GLUR2 促代謝型受體2抗體 規(guī)格: 0.1ml
TTC23 宮頸原基因8抗體 規(guī)格: 0.2mlCytokeratin 13/CK-HMW 高分子量細(xì)胞角蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
RIT1 RIT1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlTPSB2 肥大細(xì)胞類(lèi)β2 規(guī)格: 0.1ml
操作步驟如下:
1 液體石蠟的準(zhǔn)備 選用優(yōu)質(zhì)化學(xué)純液體石蠟,將液體石蠟分裝加塞,用牛皮紙包好,采用以下兩種方式進(jìn)行滅菌:121℃濕熱滅菌30min,置40℃恒溫箱中蒸發(fā)水分,經(jīng)無(wú)菌檢查后備用。160℃干熱滅菌2個(gè)小時(shí),冷卻后,經(jīng)無(wú)菌檢查后備用。
2 斜面培養(yǎng)物的制備 參照定期移植法。
3 灌注石蠟 將無(wú)菌的液體石蠟在無(wú)菌條件*入培養(yǎng)好的新鮮斜面培養(yǎng)物上,液面高出斜面頂部1cm左右,使菌體與空氣隔絕。
4 保藏 4.1 注入液體石蠟的菌種斜面以直立狀態(tài)置低溫(4~6℃)干燥處保藏,保藏時(shí)間2~10年。 4.2 保藏期間應(yīng)定期檢查,如培養(yǎng)基露出液面,應(yīng)及時(shí)補(bǔ)充無(wú)菌的液體石蠟。
5 恢復(fù)培養(yǎng) 恢復(fù)培養(yǎng)時(shí),挑取少量菌體轉(zhuǎn)接在適宜的新鮮培養(yǎng)基上,生長(zhǎng)繁殖后,再重新轉(zhuǎn)接一次。