Hypoxyprobe? PAb27試劑盒組件詳細信息

Hypoxyprobe?-1是一種取代的2-硝基咪唑，其化學名稱和唯1成分為匹莫尼達唑鹽酸鹽。Hypoxyprobe?-1的分子量為290.8，水溶性為400毫摩爾，相當于116毫克/毫升；在324納米處的紫外吸收，0.9%生理鹽水中的消光系數為7020。游離堿基匹莫尼達唑的分子量為254.3，pKa值為8.7，辛醇水分配系數為8.5。Hypoxyprobe?-1在固體和水溶液中都具有化學穩定性。例如，固體Hypoxyprobe-1在避光條件下室溫存放兩年，未檢測到降解（通過UV和HPLC分析評估）。在0.9%生理鹽水中的Hypoxyprobe?-1溶液以100克/升的濃度在4攝氏度下存放4.5年，未檢測到降解（通過UV和HPLC分析）。匹莫尼達唑在缺氧細胞中被還原激活，激活的中間體與蛋白質、肽和氨基酸中的巰基（硫醇）基團形成穩定的共價加合物。抗體試劑PAb27HAP能夠與這些加合物結合，從而通過免疫化學方法進行檢測。

PAb27HAP是一種高滴度親和純化的兔抗體制劑，能夠與缺氧細胞中Hypoxyprobe?-1的蛋白質加合物結合。PAb27HAP中含有疊氮鈉以增加穩定性。感興趣的組織可以通過冷凍固定或甲醛固定的石蠟包埋切片進行免疫組織化學研究；也可以通過Western blotting（蛋白質印跡）或在組織解離后進行流式細胞術進行研究。注意：PAb27HAP能夠與缺氧細胞中匹莫尼達唑的蛋白質、肽和氨基酸加合物結合，但免疫組織化學檢測過程中，組織處理會沖洗掉小分子肽和氨基酸加合物，因此免疫組織化學缺氧檢測依賴于缺氧組織中匹莫尼達唑的蛋白質加合物。

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【缺氧探針】PAb 27試劑盒：

應用：用于免疫化學檢測細胞和組織的缺氧，包括免疫熒光、免疫過氧化物酶、Western blotting（蛋白質印跡）或流式細胞術。當Hypoxyprobe? PAb27試劑盒與抗兔二抗試劑（PAb27試劑盒中不提供二抗試劑）結合使用時，在小鼠組織中的背景非常低。

數量：a. Hypoxyprobe?-1 PAb27試劑盒包含100毫克、200毫克或1000毫克的Hypoxyprobe?-1（匹莫尼達唑鹽酸鹽）。典型的劑量是小動物研究每公斤體重60毫克，人類研究每公斤體重14毫克。

b. 一個瓶（100毫克和200毫克試劑盒）或兩個瓶（1000毫克試劑盒），每個瓶含有200微升的高滴度親和純化的抗匹莫尼達唑兔抗血清，含有0.09%的疊氮鈉和1%的牛血清白蛋白作為穩定劑。PAb27HAP的最佳稀釋度需由每位研究者自行確定。

不提供：抗兔二抗試劑和標準的免疫組化（IHC）試劑，如緩沖液、底物顯色劑等。

儲存：a. 將Hypoxyprobe?-1固體存放在室溫下避光處（也可以存放在28攝氏度）。

b. 將兔PAb27HAP存放在2-8攝氏度。不要冷凍。

檢測說明

對正常或腫瘤組織缺氧的研究始于靜脈輸注、腹腔注射或口服Hypoxyprobe?-1溶液。典型的劑量為小動物研究每公斤體重60毫克，人類研究每公斤體重14毫克。對于一只25克的小鼠，這相當于每只小鼠1.5毫克。在小鼠中使用高達400毫克/公斤的劑量，未觀察到毒性或組織缺氧的變化，但60毫克/公斤可以在低成本下獲得良好的免疫染色效果。Hypoxyprobe?-1在生理鹽水中的溶解度為116毫克/毫升，因此可以使用非常小的體積來施用Hypoxyprobe?-1。

注射或攝取后，Hypoxyprobe?-1分布到所有組織，包括大腦，但它只與那些氧濃度低于14微摩爾的細胞中的含硫蛋白質形成加合物——相當于在37攝氏度下的部分壓力pO2 = 10毫米汞柱。除了腫瘤，正常的組織如肝臟、腎臟和皮膚也包含在pO2 = 10毫米汞柱或以下的細胞。這些正常組織會結合Hypoxyprobe?-1。

小鼠體內Hypoxyprobe?-1的血漿半衰期大約為25分鐘。相比之下，大鼠的血漿半衰期為45分鐘，狗為90分鐘，人類為300分鐘。感興趣的小鼠組織可在Hypoxyprobe?-1施用后15至90分鐘收獲。收獲時組織中的Hypoxyprobe?-1將在組織缺氧時被結合。然而，與組織在15至90分鐘實驗中暴露的量相比，殘留的Hypoxyprobe?-1的量非常小，因此由于殘留的Hypoxyprobe?-1引起的任何非特異性結合是不可檢測的。

除了動物研究，Hypoxyprobe?試劑盒也可用于組織培養中的細胞通常，細胞懸浮液在缺氧條件下與100到200微摩爾的Hypoxyprobe?-1一起孵化1到2小時。細胞通過細胞旋轉收獲，固定并用PAb27HAP及色原性或熒光二抗試劑進行免疫染色。

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