IgG檢測(cè)試劑盒是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫測(cè)定法（ELISA），用于測(cè)量馬生物樣品中的IgG。如果ELISA在預(yù)期用途之外使用，用戶可能需要優(yōu)化saiduse。

作為Biogradetech-d家代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦Biogradetech熱銷產(chǎn)品IgG (馬) ELISA試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

IgG (馬) ELISA試劑盒：

更多信息

抗體類型 ELISA

宿主 山羊

特異性/目標(biāo) IgG h+l

大小 1.0

檢測(cè)范圍 6.25 ng/ml - 400 ng/ml

靈敏度 2.217 ng/ml

檢測(cè)時(shí)間 60分鐘

樣本類型 牛奶、血漿、血清

儲(chǔ)存條件2-8攝氏度

檢測(cè)原理：

雙抗體夾心ELISA的原理如圖1所示。在這種測(cè)定中，樣品中存在的IgG與抗IgG抗體反應(yīng)，抗IgG抗體已吸附在聚苯乙烯微量滴定池的表面。在通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）綴合的抗IgG抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與先前結(jié)合的IgG形成復(fù)合物。在另一個(gè)洗滌步驟之后，通過(guò)添加無(wú)色底物3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來(lái)測(cè)定與免疫吸附結(jié)合的酶。結(jié)合酶的數(shù)量與所測(cè)試樣品中IgG的濃度直接相關(guān)；因此，在450nm處的吸光度是測(cè)試樣品中IgG濃度的測(cè)量值。測(cè)試樣品中IgG的量可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行插值，并根據(jù)樣品稀釋度進(jìn)行校正。

試劑準(zhǔn)備：

- 使用前將所有試劑恢復(fù)至室溫（16°C至25°C）。

- 稀釋液濃縮液 - 所提供的稀釋液是5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1部分緩沖液濃縮液，4部分dH2O）稀釋1/5。

- 洗滌液濃縮液 - 所提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1部分緩沖液濃縮液，19部分dH2O）稀釋1/20。在低溫儲(chǔ)存時(shí)濃縮液中可能會(huì)出現(xiàn)結(jié)晶。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解結(jié)晶。

- 酶-抗體結(jié)合物 - 根據(jù)每個(gè)微孔板測(cè)試條所需的工作結(jié)合物溶液量，向每個(gè)測(cè)試條使用的990 ?L 1X稀釋液中添加10 ?L酶-抗體結(jié)合物。使用前立即稀釋，并避免光照。均勻混合，但要輕柔。避免產(chǎn)生泡沫。

- 預(yù)涂層ELISA微孔板 - 按提供的狀態(tài)準(zhǔn)備使用。揭開(kāi)鋁箔袋，從袋中取出板。移除在測(cè)試中不會(huì)使用的條和孔，并將它們連同干燥劑一起重新封入袋中。

- 馬IgG校準(zhǔn)物 - 根據(jù)批次特定的分析證書(shū)準(zhǔn)備。

檢測(cè)程序：

1. 所有樣品和標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)以雙份進(jìn)行檢測(cè)。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品應(yīng)盡快裝入ELISA孔中，以避免OD讀數(shù)的變化。使用多通道移液管可以減少這種情況的發(fā)生。

- 準(zhǔn)確移液100 μL標(biāo)準(zhǔn)品0（0.0 ng/mL）兩份

- 準(zhǔn)確移液100 μL標(biāo)準(zhǔn)品1（6.25 ng/mL）兩份

- 準(zhǔn)確移液100 μL標(biāo)準(zhǔn)品2（12.50 ng/mL）兩份

- 準(zhǔn)確移液100 μL標(biāo)準(zhǔn)品3（25 ng/mL）兩份

- 準(zhǔn)確移液100 μL標(biāo)準(zhǔn)品4（50 ng/mL）兩份

- 準(zhǔn)確移液100 μL標(biāo)準(zhǔn)品5（100 ng/mL）兩份

- 準(zhǔn)確移液100 μL標(biāo)準(zhǔn)品6（200 ng/mL）兩份

- 準(zhǔn)確移液100 μL標(biāo)準(zhǔn)品7（400 ng/mL）兩份

3. 將100 μL樣品（兩份）移液到預(yù)先z定的孔中。

4. 在室溫下孵育微孔板三十（30 ± 2）分鐘。孵育期間保持板蓋好并保持水平。

5. 孵育后，吸出孔中的內(nèi)容物。

6. 用適當(dāng)稀釋的洗滌液w全填充每個(gè)孔并吸出。重復(fù)三次，總共四次洗滌。如果手動(dòng)洗滌：用洗滌緩沖液w全填充孔，然后將板倒置，將內(nèi)容物倒/搖出到廢物容器中。隨后將孔在吸水紙上用力敲擊以去除殘留緩沖液。重復(fù)三次，總共四次洗滌。

7. 向每個(gè)孔中準(zhǔn)確移液100 μL適當(dāng)稀釋的酶-抗體結(jié)合物。在室溫下孵育二十（20 ± 2）分鐘。孵育期間保持板蓋好，置于暗處并保持水平。

8. 如步驟5/6所述洗滌并吸干孔。

9. 向每個(gè)孔中準(zhǔn)確移液100 μL TMB底物溶液。

10. 在暗處室溫下精確孵育十分鐘（10）。

11. 十分鐘后，向每個(gè)孔中添加100 μL終止溶液。

12. 在30分鐘內(nèi)測(cè)定每個(gè)孔中內(nèi)容物的吸光度（450 nm）。根據(jù)制造商的規(guī)格校準(zhǔn)板閱讀器。

Biogradetech成立于2015年，總部位于美國(guó)加利福尼亞州，早期以產(chǎn)品技術(shù)研發(fā)服務(wù)起家，逐步發(fā)展了廣泛的產(chǎn)品線，并將其商業(yè)化銷售，包括蛋白質(zhì)、抗體、酶、培養(yǎng)基、試劑盒和儀器。適用于細(xì)胞生物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、診斷學(xué)、生物化學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、血液分析和高通量藥物篩選等領(lǐng)域。

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