THP-1適用胎牛血清NoverseNFBS-2500A

適合用于常規細胞原代細胞以及干細胞的培養
內毒素含量極低 <3EU/ml(規定：特級胎牛血清<10 EU/ml)
極利于細胞的生長和傳代 ，適合各種細胞培養
七次無菌過濾，zui后三次為0.1 µm無菌過濾處理
進行細菌、真菌、支原體、病毒及病毒抗體檢測，符合動物協會要求

THP-1適用胎牛血清NoverseNFBS-2500A

細胞介紹

該細胞對乳汁珠和激活的紅細胞有吞噬作用，無表面和胞質免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA誘導單核細胞分化。

細胞特性

1. 來源：急性單核細胞白血病，單核細胞
2. 形態：單核細胞，懸浮 

細胞培養步驟

一．培養基及培養凍存條件準備：

1. 準備RPMI-1640培養基；Noverse優等胎牛血清，10%；0.05 mM β－巰基乙醇；雙抗，1%。
2. 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3. 凍存液：90%Noverse優等胎牛血清，10%DMSO，現用現配。

血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產品性質。要除去沉淀，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產品時要搖動并加熱血清至37℃，沉淀會自然消失。

 如何避免血清中產生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的產生：

(1)解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發生。

(2) 血清分裝凍存時，須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一。

(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。

(4) 勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質。

(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

(6) 若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

 培養基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎?

一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

 為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學 研究，培養ES細胞、平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。

 有必要做熱滅活嗎?

實驗顯示，經過正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物 的分裂擴增。

若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節省時間，更確保血清的質量!

細胞培養 中出現黑點是污染嗎?如何處理?

一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成，首先，要肉眼觀察培養基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養細胞生長的狀態，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。

如果在鏡下觀察細胞，生長狀態良好，與黑點出現前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現可能與以下幾種情況有關：

(1)細胞生長過老，破碎的細胞殘骸;

(2)血清質量不好，反復凍融的結果;

(3)配制培養基的pH值偏高，不宜細胞生長;

(4)配制培養基的水質、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點;

(5)培養原代細胞中出現小黑點，可能是原代組織中的雜質，多次傳代可以消除。

 細胞培養中如何防止黑點生成?

(1) 盡可能地減少血清凍融次數。

(2) 培養基無需37℃水浴。

(3) 培養基保持PH值7.0- 7.2。

(4) 嚴格控制配制培養基的水質，容器定期刷洗。

(5) 掌握細胞傳代的時機，細胞切勿生長過老。

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適合用于常規細胞原代細胞的培養
內毒素含量極低 <3EU/ml(規定：特級胎牛血清<10 EU/ml)
極利于細胞的生長和傳代 ，適合各種細胞培養
七次無菌過濾，zui后三次為0.1 µm無菌過濾處理
進行細菌、真菌、支原體、病毒及病毒抗體檢測，符合動物協會要求

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的

牛血清是細胞培養中用量zui大的天然培養基，含有豐富的細胞生長必須的營養成份，常用于動物細胞的體外培養，具有極為重要的功能。

1.提供對維持細胞指數生長的激素，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。

2. 提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調變它們所結合的物質活力。

3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。

4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。

5.起酸堿度緩沖液作用。

6.提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。

1、如發現血清渾濁，不透明，含許多沉淀物，說明血清污染或血清中的蛋白質變性，若棕紅色，說明血清中的血紅蛋白含量太高，有溶血現象。

2、總蛋白含量

胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數值偏高，說明采血的牛齡偏大，不是胎牛，數值偏低，表明血清可能摻水了。

3、血紅蛋白

標準為不高于20mg/dl，顏色越紅，數值越高，反之，數值越低。

4、pH

國產血清，大多高于7.5，進口胎牛血清，大多低于7.5，具體原因未知，可能和牛齡有關，這也能用來初步鑒別血清的來源。

5、微生物

包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等。隨著國內血清廠家生產條件的改善提高，細菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制，支原體經過0.1um過濾，大多也能清除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴重的，主要是生產環境過程中帶入，又無法過濾，很難*清除，但對血清質量影響不大。病原性病毒，特別是BVDV，在國產血清中幾乎90%以上都存在，這類微生物是影響國產血清質量的重要因素之一，而進口胎牛血清中基本都控制的很好。

6. 免疫球蛋白

國產血清的只是定性檢測，結果也很不準確，進口胎牛血清大多定量檢測。免疫球蛋白的數值能*體現出采血的時的牛齡情況，國產血清，基本都是新生牛的，血清中容易產生IgM，IgG的含量也偏高，進口胎牛血清，不含IgM，IgG的含量也較低。

不管是國產還是進口血清，都是不測抗生素的（無四環素胎牛血清除外）。國外，抗生素的使用很嚴格，用量也很少，每頭奶牛的產品包括血清都可以溯源的，因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量極低;國內，抗生素的濫用已成了普遍現象，國產血清中殘留很高，對細胞培養極為不利，這是國產血清質量差的根本原因。