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產品簡介
詳細介紹
3、檢測方法
- 糞大腸菌
A1 儀器和設備
A1.1 高壓蒸汽滅菌器。
A1.2 干燥滅菌箱。
A1.3 培養箱：37℃。
A1.4 恒溫水浴箱。
A1.5 電爐。
A1.6 天平。
A1.7 滅菌平皿。
A1.8 滅菌刻度吸管。
A1.9 酒精燈
A2 培養基和試劑
A2.1 乳糖膽鹽培養液
A2.1.1成分
蛋白胨 20g
豬膽鹽（或牛、羊膽鹽） 5g
乳糖 5g
0.4％溴甲酚紫水溶液 2.5mL
蒸餾水 1000mL
A2.1.2 制法
將蛋白胨、豬膽鹽及乳糖溶解于1000mL蒸餾水中，調整pH到7.4，加入指示劑，充分混勻，分裝于內有倒管的試管中。115℃下滅菌20min。貯存于冷暗處備用。
A2.2 三倍濃度乳糖膽鹽培養液
A2.2.1成分
蛋白胨 60g
豬膽鹽（或牛、羊膽鹽） 15g
乳糖 15g
0.4％溴甲酚紫水溶液 7.5mL
蒸餾水 1000mL
A2.2.2 制法
制法同附錄A2.1.2。
A2.3 伊紅美蘭培養基（EMB培養基）
A2.3.1 成分
蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氫二鉀 2g
瓊脂 20g
2％伊紅水溶液 20mL
0.5％美藍水溶液 13mL
蒸餾水 1000mL
A2.3.2 制法
將瓊脂加到900mL蒸餾水中，加熱溶解，然后加入磷酸氫二鉀和蛋白胨，混勻使溶解，再加入蒸餾水補足至1000mL，調整pH至7.2～7.4。趁熱用脫脂棉和砂布過濾，再加入乳糖，混勻，定量分裝于燒瓶內，115℃滅菌20min。作為儲備培養基貯存于冷暗處備用。
臨用時，加熱融化儲備培養基，待冷至60℃左右，根據燒瓶內培養基的容量，加入一定量的已滅菌的2％伊紅水溶液和0.5％美藍水溶液，充分搖勻（防止產生氣泡）。傾注平皿備用。
A2.4 乳糖蛋白胨培養液
A2.4.1成分
蛋白胨 10g
3g
乳糖 5g
氯化鈉 5g
1.6％溴甲酚紫乙醇溶液 1mL
蒸餾水 1000mL
A2.4.2 制法
將蛋白胨、、乳糖及氯化鈉加熱溶解于1000mL蒸餾水中，調整pH到7.2～7.4，加入1.6％溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混勻，分裝于內有倒管的試管中。115℃下滅菌20min。貯存于冷暗處備用。
A2.5 革蘭氏染色液
A2.5.1 結晶紫染色液
結晶紫 1g
95％乙醇溶液 20mL
1％草酸銨水溶液 1000mL
將結晶紫溶于乙醇中，然后與草酸銨水溶液混合。
A2.5.2 革蘭氏碘液
碘 1g
碘化鉀 2g
蒸餾水 300mL
將碘與碘化鉀混合，加入蒸餾水少許，充分搖勻，待*溶解，再加入蒸餾水至300mL。
A2.5.3 脫色液
95％乙醇。
A2.5.4 沙黃復染液
沙黃 1g
95％乙醇 2g
蒸餾水 90mL
將沙黃溶于95％乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。
A2.6 染色法
染色的基本步驟為：1）涂片：在載玻片上滴加一滴生理鹽水，用滅菌的接種環取菌落少許，與生理鹽水混勻，涂布成薄膜；2）干燥：在室溫中使自然干燥；3）固定：將涂片迅速通過火焰2～3次，以載玻片反面接觸皮膚，熱而不燙為度；4）染色：滴加結晶紫染色液，染色1min，水洗；5）媒染：滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗；6）脫色：滴加95％乙醇脫色，約30s，水洗；7）復染：滴加復染液，復染1min，水洗。
革蘭氏陽性菌染色后呈紫色，革蘭氏陰性菌染色后呈紅色。
注：亦可用1：10稀釋的石炭酸復紅染色液作復染劑，復染時間為10s。
A3 檢驗程序
檢驗程序見圖A
A4 操作步驟
A4.1 樣品準備
A4.1.1 污水
污水樣品應至少取200mL，使用前應充分混勻。
根據預計的污水樣品中糞大腸菌數確定污水樣品接種量。糞大腸菌數量相對較少的接種量一般為10mL、1mL、0.1mL。糞大腸菌數較多時接種量為1mL、0.1mL、0.01mL或0.1mL、0.01mL、0.001mL等。
接種量少于1mL時，水樣應制成稀釋樣品后供發酵試驗使用。接種量為0.1mL、0.01mL時，取稀釋比分別為1:10、1:100。其它接種量的稀釋比依此類推。
1:10稀釋樣品的制作方法為：吸取1mL水樣，注入到盛有9mL滅菌水的試管中，混勻，制成1:10稀釋樣品。因此，取1mL1:10稀釋樣品，等于取0.1mL污水樣品。其它稀釋比的稀釋樣品同法制作。
注1：若樣品為經過氯消毒的污水，應在采樣后立即用5％硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。
A4.1.2 污泥
污泥樣品應至少取200g，使用前應充分混勻。
根據預計的污泥樣品中糞大腸菌數量確定污泥樣品接種量。糞大腸菌數量相對較少的污泥樣品接種量一般為0.1g、0.01g、0.001g。糞大腸菌數量較多時接種量為0.01g、0.001g、0.0001g或0.001g、0.0001g、0.00001g等。
污泥樣品應制成稀釋樣品后供發酵試驗使用。接種量0.1g、0.01g、0.001g的稀釋樣品制作方法如下：取20g污泥樣品，加入到三角燒瓶中，加滅菌水使成200mL，混勻，制成1:10稀釋樣品。吸取1:10稀釋樣品1mL，注入到盛有9mL滅菌水的試管中，混勻，制成1:100稀釋樣品。按同法制成1:1000稀釋樣品。接種1mL1:10、1:100、1:1000稀釋樣品等于接種0.1g、0.01g、0.001g污泥樣品。
注1：若樣品為經過氯消毒的污泥，應在采樣后立即用5％硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。
A4.2 發酵試驗
將樣品接種于裝有乳糖膽鹽培養液的試管（內有小倒管）中，44℃培養24h。樣品接種體積以及管內乳糖膽鹽培養液的濃度與體積根據以下條件確定：
樣品為污水時，取三個接種量、每個接種量的樣品分別接種于5個試管內，共需15個試管。試管內乳糖膽鹽培養液的濃度與體積應根據接種量確定。若接種量為10mL，吸取10mL樣品接種于裝有5mL三倍濃度乳糖膽鹽培養液的試管內；若接種量為1mL時，吸取1mL樣品接種于裝有10mL普通濃度乳糖膽鹽培養液的試管內；若接種量少于1mL時，吸取1mL稀釋樣品接種于裝有10mL普通濃度乳糖膽鹽培養液的試管內。
樣品為污泥時，取三個接種量、每個接種量的稀釋樣品分別接種于3個試管內，共需9個試管。9個試管中，各裝有10mL乳糖膽鹽培養液。各個試管接種稀釋樣品體積均為1mL。
A4.3 平板分離
大腸桿菌分解乳糖產酸時培養液變色、產氣時小倒管內出現氣泡。經24h培養后，將產酸的試管內培養液分別劃線接種于EMB培養基上。置于37℃培養箱中，培養18～24h。
A4.4 鑒定
挑選可疑糞大腸菌菌落，進行革蘭氏染色和鏡檢?？梢删溆校?）深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；2）紫黑色，不帶或略帶金屑光澤的菌落；3）淡紫紅色，中心色較深的菌落。
上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，則挑取上述典型菌落1～3個接種于盛有5mL乳糖蛋白胨培養液倒管和倒管的試管內，置于44℃培養箱中培養24h。產酸產氣試管為糞大腸菌陽性管。
A5 計數
根據證實有糞大腸菌存在的陽性管數，查表A1或A2可得100mL污水或1g污泥中糞大腸菌MPN值。
由于表A1和表A2是按一定的三個10倍濃度差接種量設計的（污水接種量為10mL、1mL和0.1mL，污泥接種量為0.1g、0.01g和0.001g），當采用其他三個10倍濃度差接種量時，需要修正表內MPN值，具體方法如下：
表內所列污水（污泥）大接種量增加10倍時表內MPN值相應降低10倍；污水（污泥）大接種量減少10倍時表內MPN值相應增加10倍。如污水接種量改為1mL、0.1mL和0.01mL時，A1表內MPN值相應增加10倍。其它的三個10倍濃度差接種量的MPN值相應類推。
由于A1表內MPN值的單位為每100mL污水樣品中MPN值，而污水以1L為報告單位，因此需將查A1表得到的MPN值乘上10，換算成1L污水樣品中的MPN值。
表A1 污水中糞大腸菌可能數（MPN）檢索表
（污水樣品接種量為5份10mL水樣，5份1mL水樣和5份0.1mL水樣）
陽性管數 | 每100mL水樣中MPN | 陽性管數 | 每100mL水樣中MPN | 陽性管數 | 每100mL水樣中MPN |
| ||||||
接種100mL水樣 | 接種10mL水樣 | 接種0.1mL水樣 | 接種100mL水樣 | 接種10mL水樣 | 接種0.1mL水樣 | 接種100mL水樣 | 接種10mL水樣 | 接種0.1mL水樣 |
| |||
0 | 0 | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 5 | 4 | 0 | 0 | 13 |
|
0 | 0 | 1 | 2 | 2 | 0 | 1 | 7 | 4 | 0 | 1 | 17 |
|
0 | 0 | 2 | 4 | 2 | 0 | 2 | 9 | 4 | 0 | 2 | 21 |
|
0 | 0 | 3 | 5 | 2 | 0 | 3 | 12 | 4 | 0 | 3 | 25 |
|
0 | 0 | 4 | 7 | 2 | 0 | 4 | 14 | 4 | 0 | 4 | 30 |
|
0 | 0 | 5 | 9 | 2 | 0 | 5 | 16 | 4 | 0 | 5 | 36 |
|
0 | 1 | 0 | 2 | 2 | 1 | 0 | 7 | 4 | 1 | 0 | 17 |
|
0 | 1 | 1 | 4 | 2 | 1 | 1 | 9 | 4 | 1 | 1 | 21 |
|
0 | 1 | 2 | 6 | 2 | 1 | 2 | 12 | 4 | 1 | 2 | 26 |
|
0 | 1 | 3 | 7 | 2 | 1 | 3 | 14 | 1 | 1 | 3 | 31 |
|
0 | 1 | 4 | 9 | 2 | 1 | 4 | 17 | 4 | 1 | 4 | 36 |
|
0 | 1 | 5 | 11 | 2 | 1 | 5 | 19 | 4 | 1 | 5 | 42 |
|
0 | 2 | 0 | 4 | 2 | 2 | 0 | 9 | 4 | 2 | 0 | 22 |
|
0 | 2 | 1 | 6 | 2 | 2 | 1 | 12 | 4 | 2 | 1 | 26 |
|
0 | 2 | 2 | 7 | 2 | 2 | 2 | 14 | 4 | 2 | 2 | 32 |
|
0 | 2 | 3 | 9 | 2 | 2 | 3 | 17 | 4 | 2 | 3 | 38 |
|
0 | 2 | 4 | 11 | 2 | 2 | 4 | 19 | 4 | 2 | 4 | 44 |
|
0 | 2 | 5 | 13 | 2 | 2 | 5 | 22 | 4 | 2 | 5 | 50 |
|
0 | 3 | 0 | 6 | 2 | 3 | 0 | 12 | 4 | 3 | 0 | 27 |
|
0 | 3 | 1 | 7 | 2 | 3 | 1 | 14 | 4 | 3 | 1 | 33 |
|
0 | 3 | 2 | 9 | 2 | 3 | 2 | 17 | 4 | 3 | 2 | 39 |
|
0 | 3 | 3 | 11 | 2 | 3 | 3 | 20 | 4 | 3 | 3 | 45 |
|
0 | 3 | 4 | 13 | 2 | 3 | 4 | 22 | 4 | 3 | 4 | 52 |
|
0 | 3 | 5 | 15 | 2 | 3 | 5 | 25 | 4 | 3 | 5 | 59 |
|
0 | 4 | 0 | 8 | 2 | 4 | 0 | 15 | 4 | 4 | 0 | 34 |
|
0 | 4 | 1 | 9 | 2 | 4 | 1 | 17 | 4 | 4 | 1 | 40 |
|
0 | 4 | 2 | 11 | 2 | 4 | 2 | 20 | 4 | 4 | 2 | 47 |
|
0 | 4 | 3 | 13 | 2 | 4 | 3 | 23 | 4 | 4 | 3 | 54 |
|
0 | 4 | 4 | 15 | 2 | 4 | 4 | 25 | 4 | 4 | 4 | 62 |
|
0 | 4 | 5 | 17 | 2 | 4 | 5 | 28 | 4 | 4 | 5 | 69 |
|
0 | 5 | 0 | 9 | 2 | 5 | 0 | 17 | 4 | 5 | 0 | 41 |
|
0 | 5 | 1 | 11 | 2 | 5 | 1 | 20 | 4 | 5 | 1 | 48 |
|
0 | 5 | 2 | 13 | 2 | 5 | 2 | 23 | 4 | 5 | 2 | 56 |
|
0 | 5 | 3 | 15 | 2 | 5 | 3 | 26 | 4 | 5 | 3 | 64 |
|
0 | 5 | 4 | 17 | 2 | 5 | 4 | 29 | 4 | 5 | 4 | 72 |
|
0 | 5 | 5 | 19 | 2 | 5 | 5 | 32 | 4 | 5 | 5 | 81 |
|
陽性管數 | 每100mL水樣中MPN | 陽性管數 | 每100mL水樣中MPN | 陽性管數 | 每100mL水樣中MPN |
| ||||||
接種100mL水樣 | 接種10mL水樣 | 接種0.1mL水樣 | 接種100mL水樣 | 接種10mL水樣 | 接種0.1mL水樣 | 接種100mL水樣 | 接種10mL水樣 | 接種0.1mL水樣 |
| |||
| ||||||||||||
| ||||||||||||
1 | 0 | 0 | 2 | 3 | 0 | 0 | 8 | 5 | 0 | 0 | 23 |
|
1 | 0 | 1 | 4 | 3 | 0 | 1 | 11 | 5 | 0 | 1 | 31 |
|
1 | 0 | 2 | 6 | 3 | 0 | 2 | 13 | 5 | 0 | 2 | 43 |
|
1 | 0 | 3 | 8 | 3 | 0 | 3 | 16 | 5 | 0 | 3 | 58 |
|
1 | 0 | 4 | 10 | 3 | 0 | 4 | 20 | 5 | 0 | 4 | 76 |
|
1 | 0 | 5 | 12 | 3 | 0 | 5 | 23 | 5 | 0 | 5 | 95 |
|
1 | 1 | 0 | 4 | 3 | 1 | 0 | 11 | 5 | 1 | 0 | 33 |
|
1 | 1 | 1 | 6 | 3 | 1 | 1 | 14 | 5 | 1 | 1 | 46 |
|
1 | 1 | 2 | 8 | 3 | 1 | 2 | 17 | 5 | 1 | 2 | 63 |
|
1 | 1 | 3 | 10 | 3 | 1 | 3 | 20 | 5 | 1 | 3 | 84 |
|
1 | 1 | 4 | 12 | 3 | 1 | 4 | 23 | 5 | 1 | 4 | 110 |
|
1 | 1 | 5 | 14 | 3 | 1 | 5 | 27 | 5 | 1 | 5 | 130 |
|
1 | 2 | 0 | 6 | 3 | 2 | 0 | 14 | 5 | 2 | 0 | 49 |
|
1 | 2 | 1 | 8 | 3 | 2 | 1 | 17 | 5 | 2 | 1 | 70 |
|
1 | 2 | 2 | 10 | 3 | 2 | 2 | 20 | 5 | 2 | 2 | 94 |
|
1 | 2 | 3 | 12 | 3 | 2 | 3 | 24 | 5 | 2 | 3 | 120 |
|
1 | 2 | 4 | 15 | 3 | 2 | 4 | 27 | 5 | 2 | 4 | 150 |
|
1 | 2 | 5 | 17 | 3 | 2 | 5 | 31 | 5 | 2 | 5 | 180 |
|
1 | 3 | 0 | 8 | 3 | 3 | 0 | 17 | 5 | 3 | 0 | 79 |
|
1 | 3 | 1 | 10 | 3 | 3 | 1 | 21 | 5 | 3 | 1 | 110 |
|
1 | 3 | 2 | 12 | 3 | 3 | 2 | 24 | 5 | 3 | 2 | 140 |
|
1 | 3 | 3 | 15 | 3 | 3 | 3 | 28 | 5 | 3 | 3 | 180 |
|
1 | 3 | 4 | 17 | 3 | 3 | 4 | 32 | 5 | 3 | 4 | 210 |
|
1 | 3 | 5 | 19 | 3 | 3 | 5 | 36 | 5 | 3 | 5 | 250 |
|
1 | 4 | 0 | 11 | 3 | 4 | 0 | 21 | 5 | 4 | 0 | 130 |
|
1 | 4 | 1 | 13 | 3 | 4 | 1 | 24 | 5 | 4 | 1 | 170 |
|
1 | 4 | 2 | 15 | 3 | 4 | 2 | 28 | 5 | 4 | 2 | 220 |
|
1 | 4 | 3 | 17 | 3 | 4 | 3 | 32 | 5 | 4 | 3 | 280 |
|
1 | 4 | 4 | 19 | 3 | 4 | 4 | 36 | 5 | 4 | 4 | 350 |
|
1 | 4 | 5 | 22 | 3 | 4 | 5 | 40 | 5 | 4 | 5 | 430 |
|
1 | 5 | 0 | 13 | 3 | 5 | 0 | 25 | 5 | 5 | 0 | 240 |
|
1 | 5 | 1 | 15 | 3 | 5 | 1 | 29 | 5 | 5 | 1 | 350 |
|
1 | 5 | 2 | 17 | 3 | 5 | 2 | 32 | 5 | 5 | 2 | 540 |
|
1 | 5 | 3 | 19 | 3 | 5 | 3 | 37 | 5 | 5 | 3 | 920 |
|
1 | 5 | 4 | 22 | 3 | 5 | 4 | 41 | 5 | 5 | 4 | 1600 |
|
1 | 5 | 5 | 24 | 3 | 5 | 5 | 45 | 5 | 5 | 5 | >1600 |
|
表A2 污泥中糞大腸菌可能數（MPN）檢索表
（污泥樣品接種量為3份0.1g泥樣，3份0.01g泥樣和3份0.001g泥樣）
陽性管數 | 每1g泥樣中MPN | 陽性管數 | 每1g泥樣中MPN | 陽性管數 | 每1g泥樣中MPN | ||||||
接種0.1 g污樣管 | 接種0.01 g污樣管 | 接種0.001 g污樣管 | 接種0.1 g污樣管 | 接種0.01 g污樣管 | 接種0.001 g污樣管 | 接種0.1 g污樣管 | 接種0.01 g污樣管 | 接種0.001 g污樣管 | |||
0 | 0 | 0 | <3 | 1 | 2 | 0 | 11 | 3 | 0 | 0 | 23 |
0 | 0 | 1 | 3 | 1 | 2 | 1 | 15 | 3 | 0 | 1 | 39 |
0 | 0 | 2 | 6 | 1 | 2 | 2 | 20 | 3 | 0 | 2 | 64 |
0 | 0 | 3 | 9 | 1 | 2 | 3 | 24 | 3 | 0 | 3 | 95 |
0 | 1 | 0 | 3 | 1 | 3 | 0 | 16 | 3 | 1 | 0 | 43 |
0 | 1 | 1 | 6.1 | 1 | 3 | 1 | 20 | 3 | 1 | 1 | 75 |
0 | 1 | 2 | 9.2 | 1 | 3 | 2 | 24 | 3 | 1 | 2 | 120 |
0 | 1 | 3 | 12 | 1 | 3 | 3 | 29 | 3 | 1 | 3 | 160 |
0 | 2 | 0 | 6.2 | 2 | 0 | 0 | 9.1 | 3 | 2 | 0 | 93 |
0 | 2 | 1 | 9.3 | 2 | 0 | 1 | 14 | 3 | 2 | 1 | 150 |
0 | 2 | 2 | 12 | 2 | 0 | 2 | 20 | 3 | 2 | 2 | 210 |
0 | 2 | 3 | 16 | 2 | 0 | 3 | 26 | 3 | 2 | 3 | 290 |
0 | 3 | 0 | 9.4 | 2 | 1 | 0 | 15 | 3 | 3 | 0 | 240 |
0 | 3 | 1 | 13 | 2 | 1 | 1 | 20 | 3 | 3 | 1 | 460 |
0 | 3 | 2 | 16 | 2 | 1 | 2 | 27 | 3 | 3 | 2 | 1100 |
0 | 3 | 3 | 19 | 2 | 1 | 3 | 34 | 3 | 3 | 3 | >1100 |
1 | 0 | 0 | 3.6 | 2 | 2 | 0 | 21 |
|
|
|
|
1 | 0 | 1 | 7.2 | 2 | 2 | 1 | 28 |
|
|
|
|
1 | 0 | 2 | 11 | 2 | 2 | 2 | 35 |
|
|
|
|
1 | 0 | 3 | 15 | 2 | 2 | 3 | 42 |
|
|
|
|
1 | 1 | 0 | 7.3 | 2 | 3 | 0 | 29 |
|
|
|
|
1 | 1 | 1 | 11 | 2 | 3 | 1 | 36 |
|
|
|
|
1 | 1 | 2 | 15 | 2 | 3 | 2 | 44 |
|
|
|
|
1 | 1 | 3 | 19 | 2 | 3 | 3 | 53 |
|
|
|
|
A6 檢驗結果報告
根據糞大腸菌MPN值，報告1L污水或1g污泥樣品中糞大腸菌MPN值。
3.2腸道致病菌
3.2.1醫療機構污水和污泥中沙門氏菌的檢驗(附錄B)
B1 儀器和設備
B1.1高壓蒸汽滅菌器。
B1.2干燥滅菌箱。
B1.3培養箱。
B1.4恒溫水浴箱。
B1.5電爐。
B1.6天平。
B1.7滅菌平皿。
B1.8 滅菌刻度吸管。
B1.9 酒精燈。
B2 培養基和試劑
B2.1 鹽增菌液（SF增菌液）
B2.1.1 成分
胰蛋白胨（或多價胨） 10g
磷酸氫二鈉（Na2HPO3） 16g
磷酸二氫鈉（NaH2PO3） 2.5g
乳 糖 4g
4g
蒸餾水 1000mL
B2.1.2 制法
除外，將以上各成分放入蒸餾水中，加熱溶化。再加入，待*溶解后，調整pH到7.0～7.1，分裝于三角燒杯內。121℃下滅菌15min備用。
B2.2 二倍濃度鹽增菌液（二倍濃度SF增菌液）
B2.2.1 成分
除蒸餾水改為500mL外，其它成分同附錄B2.1.1.
B2.2.2 制法
制法同附錄B2.1.2.
B2.3 SS培養基
B2.3.1 基礎培養基
B2.3.1.1 成分
5g
示胨 5g
三號膽鹽 3.5g
瓊脂 17g
蒸餾水 1000mL
B2.3.1.2 制法
將、示胨和膽鹽溶解于400mL蒸餾水中。將瓊脂加到600mL蒸餾水中，煮沸使其溶解。再將二者混合，121℃下滅菌15min，保存備用。
B2.3.2 完成培養基
B2.3.2.1 成分
基礎培養基 1000mL
乳糖 10g
檸檬酸鈉 8.5g
硫代硫酸鈉 8.5g
10%檸檬酸鐵溶液 10mL
1%中性紅溶液 2.5mL
0.1%煌綠溶液 0.33mL
B2.3.2.2 制法
加熱溶化基礎培養基，按比例加入除中性紅和煌綠溶液以外的各成分，充分混合均勻，調整pH到7.0，加入中性紅和煌綠溶液，傾注平板。
注：制好的培養基宜當日使用，或保存于冰箱內于18h內使用。煌綠溶液配好后應在10天以內使用。
B2.4 亞硫酸鉍瓊脂培養基（BS培養基）
B2.4.1 基礎培養基
B2.4.1.1 成分
蛋白胨 10g
5g
氯化鈉 5g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
B2.4.1.2 制法
加熱溶解各成分，按每份100mL的量分裝于250mL三角瓶中，121℃下滅菌20min備用。
B2.4.2 亞硫酸鉍貯備液
B2.4.2.1 成分
檸檬酸鉍銨 2g
亞硫酸鈉 20g
磷酸氯二鈉 10g
葡萄糖 10g
蒸餾水 200mL
B2.4.2.2 制法
將檸檬酸鉍銨溶解于50mL沸水中，同時將壓硫酸鈉溶解于100mL沸水中，混合兩液并煮沸3min，趁熱加入磷酸氯二鈉攪拌至溶解。冷卻后，加入剩余的50mL葡萄糖水溶液，貯存于冰箱中。
B2.4.3 檸檬酸鐵煌綠貯備液
B2.4.3.1 成分
檸檬酸鐵 2g
煌綠（1％水溶液） 25mL
蒸餾水 200mL
B2.4.3.2 制法
將上述成分溶解于水中，盛于已滅菌的玻璃瓶內，貯存于冰箱。
B2.4.4 完成培養基
B2.4.4.1 成分
基礎培養基 100mL
亞硫酸鉍貯備液 20mL
檸檬酸鐵煌綠貯備液 4.5mL
B2.4.4.2 制法
加熱融化基礎培養基并冷卻至50℃，同時分別加熱亞硫酸鉍貯備液和檸檬酸鐵煌綠貯備液至50℃。在無菌操作下將后者加入到前者去，充分混合，無菌傾入已滅菌的培養皿中。
B2.5 三糖鐵瓊脂培養基（TSI培養基）
B2.5.1成分
蛋白胨 20g
5g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化鈉 5g
硫酸亞鐵銨 0.2g
硫代硫酸鈉 0.2g
瓊脂 12g
酚紅 0.025g
蒸餾水 1000mL
B2.5.2 制法
將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，調pH到7.4.加入瓊脂，加熱煮沸，再加入0.2%酚紅水溶液12.5mL，搖勻。分裝試管，裝量宜多些，以便得到較高的底層。121℃下滅菌15min.放置高層斜面備用。
B2.6 沙門氏菌診斷血清
B3 檢驗程序
檢驗程序見圖B
B4 操作步驟
B4.1 樣品處理和增菌
B4.1.1 污水
取200mL污水，用滅菌濾膜進行抽濾。用100mL二倍濃度SF增菌液把濾膜上截留的雜質洗脫到滅菌三角燒瓶內，充公搖勻，置于37℃恒溫培養箱，增菌培養12～24h.
注：若樣品為經過氯消毒的污水，應在采樣后立即用5％硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。
B4.1.2 污泥
用滅菌匙稱取污泥20g，放入滅菌容器內，加入200mL滅菌水，充分混勻，制成1：10混懸液。吸取上述1：10混懸液100mL，加入到裝有100mL二倍濃度SF增菌液的已滅菌的三角燒瓶內，搖勻，置于37℃恒溫培養箱，增菌培養24h.
注：若樣品為經過氯消毒的污泥，應在采樣后立即用5％硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。
B4.2 平板分離
取上述增菌培養液，分別接種于SS培養基平板和BS培養基平板，置于37℃培養箱中，培養24～48h.觀察各平板上生長的菌落形態。
挑取在SS培養基平板上呈無色透明或中間有黑心，直徑1～2mm的菌落；挑取在BS培養基平板上呈黑色的菌落或灰綠色的可疑腸道病原菌菌落。每個平板少挑取5個菌落，接種于TSI培養基中，置于37℃培養箱中，培養18～24h.
B4.3 鑒定
B4.3.1 血清學試驗
在TSI培養基中，如不發酵乳糖，發酵葡萄糖產酸產氣或只產酸不產氣，一般產生硫化氫，有動力者，先與沙門氏A-FO多價血清作玻璃片凝集，凡與多價O血清凝集者，再與O因子血清凝集，以確定所屬別，然后用H因子血清，確定血清型。雙向菌株應證實兩相的H抗原，有Vi抗原的菌型（傷寒和丙型副傷寒沙門氏菌）應用Vi因子血清檢驗。
B4.3.2 生化試驗
應進行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質、硫化氫、動力、尿素試驗。沙門氏菌屬中除傷寒沙門氏菌和雞沙門氏菌不產氣外，通過發酵葡萄糖、產氣、均發酵甘露醇和麥芽糖（但豬沙門氏菌、雛沙門氏菌不發酵麥芽糖），不分解乳糖、蔗糖，尿素酶和靛基質為陰性，通常產生硫化氫。除雞、雛沙門氏菌和傷寒沙門氏菌的O型菌株無動力外，通常均有動力。
如遇多價O血清不凝集而一般生化反應符合上述情況時，可加做側金盞花醇、水楊素和試驗，沙門氏菌均為陰性。
B5 檢驗結果報告
根據檢驗結果，報告一定體積的樣品中存在或不存在沙門氏菌。
3.2.3醫療機構污水及污泥中志賀氏菌的檢驗方法附錄 C
C1 儀器和設備
C1.1 高壓蒸汽滅菌器
C1.2 干燥滅菌箱。
C1.3 培養箱。
C1.4 恒溫水浴箱。
C1.5 電爐。
C1.6 天平。
C1.7 滅菌平皿。
C1.8 滅菌刻度吸管。
C1.9 酒精燈。
C2 培養基和培養液
C2.1 革蘭氏陰性增菌液（GN增菌液）
C2.1.1 成分
胰蛋白胨（或多價胨） 20g
葡萄糖 1g
甘露醇 2g
枸櫞酸鈉 5g
去氧膽酸鈉 0.5g
磷酸氫二鉀 16g
磷酸二氫鉀 2.5g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000mL
C2.1.2 制法
將以上各成分加入蒸餾水中溶化，調整pH至7.0，煮沸過濾，115℃下滅菌20min.貯存于冷暗處備用。
C2.2 二倍濃度革蘭氏陰性增菌液（二倍濃度GN增菌液）
C2.2.1 成分
除蒸餾水改為500mL外，其它成分同附錄C2.1.1.
C2.2.2 制法
制法同附錄C2.1.2.
C2.3 SS培養基
同附錄B2.3.
C2.4 伊紅美藍瓊脂培養基（EMB培養基）
同附錄A2.3.
C2.5 三糖鐵瓊脂（TSI培養基）
同附錄B2.5.
C2.6 志賀氏菌診斷血清
C3 檢驗程序
檢驗程序見圖C.（略）
C4 操作步驟
C4.1 樣品處理和增菌培養
C4.1.1 污水
取200mL污水，用滅菌濾膜進行抽濾。用100mL二倍濃度GN增菌液把濾膜上截留的雜質洗脫到已滅菌的三角燒瓶內，搖勻，置于37℃恒溫培養箱，增菌培養6～8h.
注：若樣品為經過氯消毒的污水，應在采樣后立即用5％硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。
C4.1.2 污泥
取污泥30g，放入滅菌容器內，加入300mL滅菌水，充分混勻制成1：10混懸液。吸取上述1：10混懸液100mL，加入到裝有100mL二倍濃度GN增菌液的已滅菌的三角燒瓶內，攪勻，置于37℃恒溫培養箱中，增菌培養6～8h.
注：若樣品為經過氯消毒的污泥，應在采樣后立即用5％硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。
C4.2 分離
取上述增菌培養液，分別接種SS培養基平板和EMB培養基平板，置于37℃培養箱中培養24h.
挑取在SS培養基平板和EMB培養基平板上呈無色透明，直徑1～1.5mL的可疑腸道病原菌菌落。每個平板少挑取5個菌落，接種于TSI培養基，置于37℃培養箱中培養18～24h.
挑取在TSI中，葡萄糖產酸不產氣，無動力，不產生硫化氫，上層斜面乳糖不分解的菌株，可做血清學和生化試驗。
C4.3 鑒定
C4.3.1 血清學試驗
志賀氏菌屬分為四個，先與多價血清作玻璃片凝集試驗，如為陽性，再分別與A、B、C、D血清凝集，并進一步與分型血清做玻璃片凝集，后確定其血清型。
C4.3.2 生化試驗
應進行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質、硫化氫、動力、尿素試驗。志賀氏菌屬能分解葡萄糖，但不產氣（福氏志賀氏菌6型有時產生少量氣體），一般不能分解乳糖和蔗糖，宋內氏志賀氏菌對乳糖和蔗糖遲緩發酵產酸。志賀氏菌屬均不產生硫化氫，不分解尿素，無動力。對甘露醇、麥芽糖的發酵及靛基質的產生，則因菌株不同而異。
如遇多價血清玻璃片凝集試驗為陰性，而生化反應符合上述情況時，可加做肌醇、水楊酸、V-P、櫞酸鹽、等試驗。志賀氏菌屬均為陰性反應。
C5 檢驗結果報告
根據檢驗結果，報告一定體積的樣品中存在或不存在志賀氏菌。
3.3 PH測定
3.1 適用范圍
3.1.1本方法適用于飲用水、地面水及工業廢水pH的測定。
3.1.2水的顏色、濁度、膠體物質、氧化劑、還原劑及較高含鹽量均不干擾測定；但在pH小于1的強酸性溶液中，會有所謂酸誤差，可按酸度測定；在pH大于10的堿性溶液中，因有大量鈉離子存在，產生誤差，使讀數偏低，通常稱為鈉差。消除鈉差的方法，除了使用特制的低鈉差電極外，還可以選用與被測溶液的pH值相近似的標準緩沖溶液對儀器進行校正。
溫度影響電極的電位和水的電離平衡。須注意調節儀器的補償裝置與溶液的溫度*，并使被測樣品與校正儀器用的標準緩沖溶液溫度誤差在±10C之內。
定義
原理
以玻璃電極為指示電極，以Ag/AgCl等為參比電極合在一起組成pH復合電極。利用pH 復合電極電動勢隨氫離子活度變化而發生偏移來測定水樣的pH值。復合電極pH計均有溫度補償裝置，用以校正溫度對電極的影響，用于常規水樣監測可準確至0.1pH單位。較精密儀器可準確到0.01pH單位。為了提高測定的準確度，校準儀器時選用的標準緩沖溶液的pH值應與水樣的pH值接近。
試劑
3.4.1標準緩沖溶液的配制方法
3.4.1.1試劑和蒸餾水的質量
3.4.1.1.1在分析中，除非另作說明，均要求使用分析純或優級純試劑。購買經中國計量科學研究院檢定合格的袋裝pH標準物質時，可參照說明書使用。
3.4.1.1.2配制標準溶液所用的蒸餾水應符合下列要求：煮沸并冷卻、電導率小于2×106S／cm的蒸餾水，其pH以6.7-7.3之間為宜。
3.4.1.2測量pH時，按水樣呈酸性、中性和堿性三種可能，常配制以下三種標準溶液：
3.4.1.2.1pH標準溶液甲（pH4.008, 250C）稱取先在110-1300C干燥2-3小時的鄰苯二甲酸氫鉀10.12克, 溶于水并在竄量瓶中稀釋至1升。
3.4.1.2.2pH標準溶液乙(pH6.865, 250C)分別稱取先在110-1300C干燥2-3小時的磷酸二氫鉀3.388克和磷酸氫二鈉3.533克,溶于水并在竄量瓶中稀釋至1升。
3.4.1.2.3pH標準溶液丙(pH4.008, 250C)為了使晶體具有一定的民,應稱取與飽和溴化鈉溶液共同放置在干燥器中平衡兩晝夜的硼砂3.80克,溶于水并在一瓶中稀釋至1升.
3.4.1標準溶液的保存
3.4.1.1標準溶液要在聚乙烯瓶或硬質玻璃瓶中密閉保存.
3.4.1.2在室溫條件下標準溶液一般以保存1-2個月為宜, 當發現有渾濁、發霉或沉淀現象時，不能繼續使用。
3.4.1.3在40C冰箱內存放，且用過的標準溶液不允許再倒回去，這樣可延長使用期限。
3.5 儀器
2.5.1酸度計。常規檢驗使用的儀器，至少應當精確到0.1 pH單位，pH范圍從0－14。如有特殊需要，應使用精度更主的儀器。
3.5.2復合電極
3..6 樣品保存
現場測定。否則，應在采樣后把樣品保持在0 －4度，并在采樣后6小時之內進行測定。
3.7 步驟
32.7.1儀器校準:操作程序按儀器使用說明書進行.先將水樣與標準溶液高速到同一溫度, 記錄測定溫度, 并將儀器溫度補償旋鈕調至該溫度上。用標準溶液校正儀器，該標準溶液與水樣pH相差不超過2個pH單位。從標準溶液中取出電極，*沖洗并用濾紙吸干。再將電極浸入第二個標準溶液中，其pH大約與*個標準溶液相差3個pH單位，如果儀器響應的示值與第二個標準溶液的pH（S）值之差大于0.1 pH單位，就要檢查儀器、電極或標準溶液是否存在問題。當三者均正常時，方可用于測定樣品。
3.7.2樣品測定
測定樣品時，先用蒸餾水認真沖洗電極，再用水樣沖洗，然后將電極浸入樣品中，小心搖動或進行攪拌使其均勻，靜置，待讀數穩定時記下pH值。
注意事項
3.8.1電極在測量前必須用已知pH值的標準緩沖溶液進行定位校準，為取得更正確的結果，已知pH值要可靠，而且其pH值愈接近被測值愈好。
3.8.2取下帽后要注意，在塑料保護柵內的敏感玻璃泡不與硬物接觸，任何破損和擦毛都會使電極失效。
3.8.3測量完畢，不用時應將電極保護帽套上，帽內應放少量補充液，以保持電極球泡的濕潤。
3.8.4復合電極的外參比補充液為3M溶液（附件有：內裝3M小瓶一只，用戶只需加入20ml蒸餾水搖勻，此溶液即為外參比補充液），補充液可以從上端小孔加入。
3.8.5電極的引出端，必須保持清潔和干燥，防止輸出兩端短路：否則將導致測量結果失準或失效。
3.8.6電極應輸入阻抗較高的酸度計（≥1012Ω）配套，能使電極保持良好的特性。
3.8.7電極避免長期浸在蒸餾水中或蛋白質溶液和酸性氟化物溶液中，并防止和有機硅油脂接觸。
3.8.8電極經長期使用后，如發現梯度略有降低，則可把電極下端浸泡在4%HF（）中3—5秒鐘，用蒸餾水洗凈，然后在溶液中浸泡，使之復新。