詳細介紹
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
產品屬性:
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
前列腺基質細胞 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X1383 |
商品介紹:
名稱 前列腺基質細胞 2.組織來源:前列腺 3.產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介: 人前列腺基質細胞分離自前列腺組織;前列腺(Prostate)是雄性*的性腺器官;前列腺是不成對的實質性器宮,由腺組織和肌組織構成。前列腺如栗子,底朝上,與膀胱相貼,尖朝下,抵泌尿生殖膈,前面貼恥骨聯合,后面依直腸。前列腺腺體的中間有尿道穿過,扼守著尿道上口,所以,前列腺有問題時,排尿首先受影響。前列腺是機體非常少有的,具有內、外雙重分泌功能的性分泌腺。作為外分泌腺,前列腺每天分泌前列腺液,是構成精液主要成分;作為內分泌腺,前列腺分泌的激素稱為“前列腺素"。常見疾病為良性前列腺增生,在病理學上良性前列腺增生癥又稱前列腺結節狀增生,是前列腺中最常見的產生癥狀的瘤樣病變,結節開始發生可能是基質細胞自發逆轉至胚胎階段,其生長潛力可能是基質-上皮之間的相互協同作用所致,最終形成前列腺增生。基質細胞是器官中結締組織細胞,起到為器官中實質細胞提供支持和營養的作用,成纖維細胞、炎癥細胞、免疫細胞以及周皮細胞都是常見的基質細胞類型。基質細胞和腫瘤細胞的相互作用在腫瘤細胞的生長過程中具有重要作用。體外培養人前列腺基質細胞對治療前列腺增生有重要的研究意義。 5.方法簡介: 實驗室分離的人前列腺基質細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測: 實驗室分離的人前列腺基質細胞經Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息: 包被條件貼壁不包被 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-H244 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態成纖維細胞樣 傳代特性可傳5代左右;3代以內狀態最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 alpha-Galactosidase A / GLA 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 Cystatin 7 / CST7 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 TNFRSF11A 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 Pleiotrophin / PTN / HB-GAM 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 WIF1 / WIF-1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
Adiponectin / Acrp30 / ADIPOQ 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CST9L / Testatin 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
GPX7 / Glutathione Peroxidase 7 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
IFITM3 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
ADM / Adrenomedullin 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
前列腺基質細胞葡萄糖酸內酯抗體Anti-CD19 Antibody(原貨號PB0404)雙埃柯病PCR檢測試劑盒說明書
蛋白2C亞型α抗體Anti-CD1D Antibody乙型脊髓灰質炎病PCR檢測試劑盒說明書
蛋白激C nu型抗體Anti-CD1A Antibody人Nucleostemin基因PCR檢測試劑盒品牌
化蛋白激C nu型抗體Anti-CD1C Antibody犬布氏桿PCR檢測試劑盒說明書
化磷脂酰肌激3催化亞單位3抗體Anti-CD1A Antibody偽狂犬病PCR檢測試劑盒說明書
甘油酸脫氫抗體Anti-CD19 Antibody豬細小病PCR檢測試劑盒品牌
化泌乳素抗體Anti-CD1D Antibody病H9亞型PCR檢測試劑盒多少錢
半胱天冬-3原抗體Anti-CD2 Antibody腺病PCR檢測試劑盒規格