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分子生物學

核酸提取/純化

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分子克隆

其它分子生物學試劑

CAS	-	純度	-
分子量	-	分子式	-
供貨周期	現貨	規格	100T
貨號	abs60371	應用領域	化工,生物產業,綜合
主要用途	-

SfiI 快速內切酶是一系列經過基因工程重組的快速限制性內切酶，適用于質粒 DNA、PCR 產物或基因組 DNA 等的快速酶切。所有快速內切酶在通用的 CutOne 或 CutOne ColorBuffer 中都具有優良的活性，能夠在 5~15 分鐘內完成酶切。

詳細介紹

產品描述

描述

SfiI 快速內切酶是一系列經過基因工程重組的快速限制性內切酶，適用于質粒 DNA、PCR 產物或基因組 DNA 等的快速酶切。所有快速內切酶在通用的 CutOne 或 CutOne ColorBuffer 中都具有優良的活性，能夠在 5~15 分鐘內完成酶切。此外，去磷酸化、連接試劑在 CutOne Buffer 中均具有 100% 活性，支持一管化反應，提升“酶切 - 修飾 - 連接"的體驗。CutOne Color Buffer 包括紅色和黃色示蹤染料，可將產物直接用于凝膠電泳。CutOne Color Buffer 的紅色染料與 2500 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與 10 bp雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。

識別位點：
5'...G G C C N N N N ↓ N G G C C...3'
3'...C C G G N ↑ N N N N C C G G...5'

建議反應條件：
1× CutOne™ 緩沖液；
50℃溫育；
參照“DNA 快速酶切流程"配制反應體系。

失活條件：
不可熱失活，請使用酚氯仿抽提或柱純化。

產品組成：

組分	規格
SfiI	100 μl
10× CutOne Buffer	1 ml
10× CutOne Color Buffer	1 ml

使用方法

使用方法
1、DNA 快速酶切流程
（1）在冰上按如下建議的加樣順序配制反應體系：

組分	質粒 DNA	PCR 產物	基因組 DNA
ddH2O	15ul	16ul	30ul
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer	2ul	3ula	5ul
底物 DNA	2ul (up to 1ug)	10ul (~0.2ug)	10ul (5ug)
SfiI	1ul	1ul	5ul
Total	20ul	30ul	50ul

a. 本體系適用于經過純化的 PCR 產物酶切。未純化的 PCR 產物具備一定的離子強度，10× Cutone Buffer 加入量可適當減少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同時具有外切酶活性，會影響酶切產物，因此如下一步需進行（2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴；
（3）50℃溫育 15 min（質粒），或 15~30 min（PCR 產物），或 30~60 min（基因組 DNA）；
（4）酚氯仿抽提或柱純化（可選）；

（5）如果使用 CutOne Color Buffer 進行酶切反應，得到的產物可以直接進行上樣電泳。

2、雙酶切或多酶切
（1）每種快速內切酶的用量為 1 μl，并根據需要適當擴大反應體系；
（2）所有快速內切酶的體積總和不得超過總反應體系的 1/10；

（3）如果所用的幾種快速內切酶的最適反應溫度不同，應先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，在其最適反應溫度下進行酶切反應。

3、適用于質粒的擴大反應體系

DNA	1ug	2ug	3ug	4ug	5ug
SfiI	1ul	2ul	3ul	4ul	5ul
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer	2ul	2ul	3ul	4ul	5ul
Total	20ul	20ul	30ul	40ul	50ul

不同 DNA 中的酶切位點數量

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
0	0	0	0	0	1	0	3

甲基化修飾影響

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
無影響	剪切受影響	剪切受影響	無影響	無影響

在不同反應緩沖液中的活性

CutOne Buffer

Thermo Scientific

FastDigest Buffer

NEB

CutSmart® Buffer

Takara

QuickCut™ Buffer

活性

100%

儲存/保存方法

-20°C 及以下運輸及保存，長期保存建議放 80°C 。有效期2年。

技術指標

質量控制：
功能活性檢測：
50℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反應體系中，1 μl SfiI 能夠在 15 min 內消化 1 μg pEPE DNA。
超長時間溫育檢測：
50℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反應體系中，將 1 μl SfiI 與 1 μg pEPE DNA 共同溫育 3 h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解。更長時間酶切可能出現星號活性。
酶切 - 連接 - 再酶切檢測：
50℃下，使用 10 倍酶量的 SfiI 消化 DNA 底物，回收酶切產物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以將超過 95%的酶切產物重新連接。將連接產物再次回收后，使用相同的內切酶可以重新切開 95% 以上的連接產物。
非特異性內切酶活性檢測：
50℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反應體系中將 1 μl SfiI 與 1 μg 超螺旋質粒 DNA 共同溫育 4 h 后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，少于 10% 的質粒 DNA 轉變成缺刻或線性狀態。

溫馨提示：本產品僅作科研實驗使用，不支持臨床等研究

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