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3.0 時代：人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基
閱讀：2222發(fā)布時間：2018-1-8
人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基的發(fā)展
人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)一開始使用基礎(chǔ)培養(yǎng)基（DMEM，DMEM-F12等）配比牛血清的*培養(yǎng)基，因為牛血清作為異源物，可能會帶來病原體污染，此后有使用人血清、血小板裂解液和臍帶血清等作為替代，雖然也不能*免除威脅。血清和這些替代品還有一個缺點，都是天然產(chǎn)物，批次間并不穩(wěn)定，不利于研究和臨床應用所需的一致性。
隨著臍帶華通氏膠MSC等各種間充質(zhì)干細胞的發(fā)現(xiàn)，間充質(zhì)干細胞能大量獲得，MSC治療發(fā)展后，培養(yǎng)基批次穩(wěn)定、沒有污染是必要條件，商用的無血清培養(yǎng)基因而成為*選擇。
1.0 時代 培養(yǎng)基+牛血清
2.0 時代 培養(yǎng)基+牛血清替代品
3.0時代 無血清、成分確定的培養(yǎng)基
1 HY STEMCELL CCGmHuMTM 人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基
CCGmHuMTM 是一款成分確定、無血清、無異源物，無需鋪板膠的*培養(yǎng)基。適用臍帶脂肪等來源的人間充質(zhì)干細胞的原代培養(yǎng)。培養(yǎng)的hMSC可傳多代。基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加HEPES和L-谷氨酰胺。細胞因子添加物中含有多種細胞生長因子、粘附蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、微量元素和人白蛋白等成分。
2 StemCell MesenCult 人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基
MesenCult是一款標準的無血清、無異源MSC培養(yǎng)基。優(yōu)化用于骨髓間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)和CFU-F 分析。
3 Gibco StemPro MSC SFM 人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基
StemPro MSC SFM是間充質(zhì)干細胞的*款商用無血清培養(yǎng)基，而且已經(jīng)被FDA批準作為醫(yī)療產(chǎn)品使用。
干細胞行業(yè)的標準化
2015年國家政策重新開放干細胞行業(yè)以來，衛(wèi)計委等已經(jīng)發(fā)布了多個文件：
《國家重點研發(fā)計劃干細胞與轉(zhuǎn)化醫(yī)學重點專項實施方案（征求意見稿）》
目標：凝聚優(yōu)勢力量，重點針對干細胞發(fā)生，發(fā)育和形成功能細胞過程中的重要科學問題，深入開展干細胞、生物材料、組織工程、生物人工器官，以及干細胞與疾病發(fā)生等方面的基礎(chǔ)研究、應用基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化開發(fā)。整體提升我國干細胞及其轉(zhuǎn)化醫(yī)學領(lǐng)域的實力，加快科研成果的應用。
《干細胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導原則》（試行）（征求意見稿）
培養(yǎng)基部分：
若使用商業(yè)來源培養(yǎng)基，應選擇有資質(zhì)的生產(chǎn)商并由其提供培養(yǎng)基的組成成分資料及相關(guān)質(zhì)量合格證明。必要時，應由專業(yè)檢定機構(gòu)對每批培養(yǎng)基進行質(zhì)量檢驗，并出具檢驗報告。
除特殊情況外，應盡可能避免在干細胞培養(yǎng)過程中使用人源或動物源性血清，不得使用同種異體人血清或血漿。如必須使用動物血清，應確保其無特定動物源性病毒污染。嚴禁使用海綿體狀腦病流行區(qū)來源的牛血清。
《干細胞臨床研究管理辦法（試行）》關(guān)于干細胞臨床研究的醫(yī)療機構(gòu)的條件與責任、干細胞臨床研究的立項與備案、臨床研究流程及要求、臨床研究報告制度、專家委員會責任和監(jiān)督管理。
《*干細胞臨床研究機構(gòu)名單》*30家單位
《第二批干細胞臨床研究備案機構(gòu)》次批72家單位 2017年11月
《干細胞通用要求》圍繞干細胞制劑的安全性、有效性及穩(wěn)定性等關(guān)鍵問題，建立了干細胞的供者篩查、組織采集、細胞分離、培養(yǎng)、凍存、復蘇、運輸及檢測等的通用要求。
在大形勢下，間充質(zhì)干細胞的治療應用同樣在規(guī)范化。《人類間充質(zhì)干細胞庫建設(shè)與管理規(guī)范》規(guī)定了人體來源間充質(zhì)干細胞庫相關(guān)的生命倫理、間充質(zhì)干細胞庫建設(shè)、機構(gòu)設(shè)置、操作規(guī)范和安全管理的基本方法。
間充質(zhì)干細胞
間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cells，MSCs）來源于中胚層，是一種類似成纖維細胞樣形態(tài)，貼壁生長，表達CD105、CD73、CD90，不表達CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79a或CD19的細胞；它可以從骨髓、脂肪、臍帶華通氏膠、胎盤、臍帶血、牙髓、絨毛膜等多種組織中被分離出來；它是具有高度自我更新能力和多向分化潛能的多能干細胞，能體外培養(yǎng)并在特定條件下分化為神經(jīng)細胞、成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞等。MSCs在細胞治療中有廣泛的用途，包括組織工程、再生醫(yī)學和被用作基因治療的載體。
羊水也含間充質(zhì)干細胞
不同來源的人類間充質(zhì)干細胞
——《人類間充質(zhì)干細胞庫建設(shè)與管理規(guī)范》
新生兒臍帶來源間充質(zhì)干細胞
新生兒胎盤來源間充質(zhì)干細胞
新生兒臍帶血來源間充質(zhì)干細胞
人類脂肪來源間充質(zhì)干細胞
人類牙髓來源間充質(zhì)干細胞
人類骨髓來源間充質(zhì)干細胞
人類子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞
人類羊水來源間充質(zhì)干細胞
人類母乳來源間充質(zhì)干細胞
人類滑膜來源間充質(zhì)干細胞
無血清培養(yǎng)基
無血清培養(yǎng)基(serum free medium, SFM)：是不需要添加血清就可以維持細胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養(yǎng)基。簡單地認為是體外細胞培養(yǎng)過程中的細胞培養(yǎng)基中不含有動物或人的血清，稱為無血清細胞培養(yǎng)基。無血清培養(yǎng)基的基本配方是基本成分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。大多數(shù)的無血清培養(yǎng)基含有必須的向細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運離子的轉(zhuǎn)鐵蛋白和調(diào)節(jié)葡萄糖攝取量的胰島素，以及一些蛋白質(zhì)如纖連蛋白、球蛋白、細胞生長因子等。
無血清培養(yǎng)基被廣泛的應用于培養(yǎng)哺乳動物和無脊動物細胞以制備單克隆抗體、病毒抗原、重組蛋白、疫苗等的生產(chǎn)。
無血清培養(yǎng)基應用的優(yōu)點：（1）成分的限定性；（2）產(chǎn)品質(zhì)量一致性；（3）簡化生產(chǎn)過程；（4）易于控制培養(yǎng)環(huán)境；（5）細胞類型的優(yōu)化配方。
參考文獻
1 Dolly Mushahary,et al.Isolation, C*tion, and Characterization of Human Mesenchymal Stem Cells.
2 人類間充質(zhì)干細胞庫建設(shè)與管理規(guī)范，SZDB/Z 126-2015.
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