SURE Electroporation-Competent Cell

產品規格

SURE                   50μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                                10μl

保存條件(保質期)：                                         -80℃（6個月）

基因型

E. coli B e14^-(mcrA^-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kan^r) uvrC [F´ proAB lacI^qZΔM15 Tn10 (Tet^R)]

SURE Electroporation-Competent Cell產品說明

SURE電擊感受態細胞只能用于電擊轉化，不能用于熱激轉化。真核生物DNA存在較多“十字型”、“Z字型”等二級或三級結構，這種DNA結構在利用傳統大腸桿菌進行克隆時易被大腸桿菌體內的重組酶系統或其他防御系統識別并對其進行重組，刪除等破壞，導致很難對這類DNA進行正確的克隆操作。SURE菌株可以解決這些問題：此菌株體內重組酶系統整條通路被破壞，并且 (mcrA-, mcrCB-, mcrF-, mrr-, hsdR-)這些限制性突變的存在賦予此菌株無法對外源DNA進行標記、限制，提高了外源甲基化DNA的克隆效率，同時具有核酸酶 (endA)突變、重組酶 (recB recJ)突變，增強了外源DNA的穩定性。存在于F´因子上的lacI^qZΔM15基因使此菌株可以進行藍白斑篩選；Kan^R，Tet^R賦予菌株卡那霉素和四環素抗性。SURE電擊感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>0.5×10¹⁰ cfu/μg DNA。

操作方法

1. 0.1 cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙

醇充分揮發，待乙醇揮發干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋，冰中

靜置5分鐘充分降溫。

2. 取-80℃保存的SURE電擊感受態細胞插入冰中5 分鐘，待其融化，加入目的DNA (質粒或連接產物)

并用手打EP管底輕輕混勻，避免產生氣泡，立即插入冰中。

A. 測定轉化效率使用1 μl 10 pg/μl的對照質粒 pUC19；

B. 對于連接產物，請用乙醇沉淀DNA后加入適量TE緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重

懸，DNA濃度不超過100 ng/μl，體積不超過5 μl/50 μl感受態。

3. 用200 μl槍頭(用刀切除0.5cm槍尖)將感受態-DNA混合物快速移到電擊杯中，避免產生氣泡，蓋上杯蓋。

4. 啟動電轉儀，設置參數：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此為BioRad 電轉儀推薦參數，也可按所用

電轉儀推薦的參數操作），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中。

5. 2分鐘后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入1ml不含抗生素的無菌S.O.C. 培養基（室溫），用1ml

槍吹吸電擊杯底部數次混勻后，轉移到50 ml離心管（BD Falcon 50 ml錐形離心管等），向離心管中

補加S.O.C. 培養基至10 ml。傾斜45度放入搖床，37℃，225 rpm復蘇60分鐘。

6. 5000 rpm離心一分鐘收菌，重懸后取100-200 μl涂布到含相應抗生素的S.O.C平板上（因菌量較大，

若全部涂板請選用直徑15cm培養皿2-5個）。將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養13-17小時。