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細胞培養試劑人或各種動物組織單個核細胞分離液
規格:100ml/kit
保存:室溫避光儲存,有效期少 2 年。
產品簡介:
本品為帶有乳光或微乳光的滅菌水溶液。主要成分是 Ficoll 400 與泛影酸葡甲胺。適用于從各種動物組織樣本中分離單個核細胞, 在醫療和醫學生物學研究中廣泛應用。 其他人及動物多種比重細胞分離液。
注:因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數及細胞帶電不同,所以用戶在定制分離液時應提供所需分離液的比重、動物的種屬及被分離細胞的名稱。
一、 分離方法說明及圖例
A.取組織勻漿單細胞懸液(細胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個/ml,具體制備方法參照“組織單細胞懸液的制備”)2ml,小心加于2ml本分離液之液面上;
B. 以400g(約1500轉/分)離心15分鐘(半徑15cm水平轉子)。
此時離心管中由上下細胞分為四層。 *層; 為胎牛血清液層。 第二層; 為環狀乳白色單個核細胞層。 。 。 。
第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含4-5ml細胞洗滌液的試管中,充分混勻后,以500g(約1800轉/分)離心20分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復洗滌2次即得所需單個核細胞。
注: 提取率約為80%。
二、組織單細胞懸液的制備
注:A.本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法,酶消化法由于各實驗室選取的消化酶種類各不相同,請各實驗室自行選擇進行試驗。
B. 全過程及所需試劑要求無菌環境 全過程及所需試劑要求無菌環境。
剪碎法:將組織塊放入平皿后,加入少量組織勻漿液及20%胎牛血清;用眼科剪將組織剪勻漿狀,加入5ml組織勻漿液及20%胎牛血清;用吸管吸取組織勻漿,用100目不銹鋼濾網過濾到試管內;離心沉淀1500轉/分×3 min,再用細胞洗滌液清洗3次,每次以500rpm短時低速離心除去細胞碎片,以200目不銹鋼濾網過濾去細胞團塊。作細胞計數并調整細胞濃度為(2~5)×10 7 個/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為2×108-1×10 9 個/ml的單細胞懸液備用。
勻漿器法:用眼科剪將組織剪成小塊;放入70ml組織研磨器內,加入2ml組織勻漿液及20%胎牛血清;緩慢轉動研棒,研磨勻漿;用5ml組織勻漿液及20%胎牛血清沖洗研器;收集細胞懸液,經200目不銹鋼濾網過濾;離心沉淀800rpm×2min ,再用細胞洗滌液洗3次,離心沉淀。作細胞計數并調整細胞濃度為(2~5)×10 7 個/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個/ml的單細胞懸液備用。
細胞計數方法:
細胞計數法是用來計數細胞懸液中細胞數量的一種方法。一般利用計數板(血球計數板)進行。既可用于分離(散)細胞培養接種前計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,也可用于對培養物的細胞數量進行計數。
不論計數的對象如何,均須制備分散的細胞懸液。
計數與計算過程
1)、在細胞計數板中央放置計數的蓋玻片。
2)、用玻璃虹吸管吸取細胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數板凹蹧處流出懸液,蓋玻片被液體充滿為止。
3)、置顯微鏡下計數四角大方格內的細胞總數。對于壓線的細胞只計數在上線和左線者,對于細胞團按單個細胞計數。
4)、按下式計數細胞懸液的密度: 細胞密度=(4個大格細胞總數/4)×10 4 個/ml×稀釋倍數公式中乘以10 4 因為計數板中每一個大格的體積為:
1.0mm(長)×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm 3 而 1ml=1000mm 3
細胞計數要點:
A. 進行細胞計數時,要求懸液中細胞數目不低于10 4 個/ml,如果細胞數目很少要進行離心再懸浮于少量培養液中;顯微鏡下計數時,遇到2個以上細胞組成的細胞團,應按單個細胞計算。如果細胞團>10%,說明細胞分散不充分; 或細胞數<200個/10mm 2 或>500個/10 mm 2 時,說明稀釋不當,需重新制備細胞懸液。
B. 要求細胞懸液中的細胞分散良好,否則影響計數準確性。
C. 取樣計數前,應充分混勻細胞懸液,尤其是多次取樣計數時更要注意每次取樣都要混勻,以求計數準確;
D. 數細胞的原則是只數完整的細胞,若細胞聚集成團時,只按照一個細胞計算。如果細胞壓在格線上時,則只計上線,不計下線,只計左線,不計右線。
E. 操作時,注意蓋玻片下不能有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中,否則要重新計數。
三、 注意事項
A. 本分離液是敏光型的,在運輸和貯藏過程中應在18℃-25℃避光保存,啟封后置4℃保存避免微生物污染。另外,本品為真空包裝,未啟封前置于10℃ 以下易出現白色結晶,影響分離效果。
B. 待分離的樣本要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時分離效果好,且所有操作過程一定要在無菌條件下進行。
C. 由于各品牌離心機的性能不同,國內南北地區溫度環境和四季的差異,可能影響分離效果,用戶可以調節離心轉數,調節離心的時間,摸索的分離條件(具體分離條件各實驗室自定)。
D. 好使用無靜電反應的離心管,推薦使用未經過堿處理的玻璃離心管。
E. 優抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。應注意在血液稀釋過程中應去除抗凝劑體積 。
四、產品性能指標
pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內毒素 ≤0.5EU/ml
無菌 直接接種培養14 天后培養基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每50ml 溶液中含10μm 以上的不溶性微粒20 粒以下,
含25μm 以上的不溶性微粒5 粒以下
五、貯藏及保存期限
18℃-25℃避光保存,有效期兩年。啟封后置4℃保存,有效期一周。
注:若保證無微生物污染,啟封后可置4℃長期保存。但應注意保存溫度較低時本分離液易出現白色結晶,影響分離效果。
細胞培養試劑人或各種動物組織單個核細胞分離液訂購說明:
1、絕大部分產品備有現貨,一般情況下都能訂貨當日發貨。
2、部分非常用產品,需提前1-2日預訂,海外期貨則需要提前3-6周預訂。
3、部分產品價格會因貨期、批次等因素發生變化,若有變動以訂貨當日新價格為準。
4、每日訂單截止時間為16點整,部分城市可到17點整,因超過截止時間造成當日不能發貨的將于次日安排發貨。
5、請辦理完貨款后,將收據、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。
運輸說明:
1、極低溫產品:極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩定如一,為您的實驗保駕護航。
2、低溫產品:低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩定如一,為您的實驗保駕護航。
3、常溫產品:常溫產品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產品由公司庫房人員快速配貨,準確快速高效的快遞保證產品快速送達您的手中。