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生物試劑:Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進(jìn)口試劑。
標(biāo)準(zhǔn)品對照品:進(jìn)口對照品,進(jìn)口對照藥材,進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品.
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TNF的產(chǎn)生:
(1)TNF-α是一種單核因子,主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生,LPS是較強(qiáng)的刺激劑。IFN-γ、M-CSF、GM-CSF對單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α有刺激作用,而PGE則有抑制作用。前單核細(xì)胞系U937、前髓細(xì)胞系HL-60在PMA刺激下可產(chǎn)生較高水平的TNF-α。T淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞雜交瘤、T淋巴樣細(xì)胞系以NK細(xì)胞等在PMA刺激下也可分泌TNF-α。SAC、PMA、抗IgM可刺激正常B細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α。此外,中性粒細(xì)胞、LAK、星狀細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞亦可產(chǎn)生TNF-α。
(2)TNF-β是一種淋巴因子,抗原和絲裂原均可刺激T淋巴細(xì)胞分泌TNF-β。PMA刺激RPMI1788B淋巴母細(xì)胞可分泌高水平TNF-β。
TNF的分子結(jié)構(gòu)和基因:
(1)人的TNF-α基因長約2.76kb,小鼠為2.78kb,結(jié)構(gòu)非常相似,均由4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子組成,與MHC基因群密切連鎖,分別定位于第6對和第17對染色體上。1984年從HL-60、U937等細(xì)胞中克隆成功rHu TNF-α cDNA,并在大腸桿菌中獲得高表達(dá)。 人TNF-α前體由233個(gè)氨基酸殘基組成,含76個(gè)氨基酸殘基的信號肽,切除信號肽后成熟型TNF-α為157氨基酸殘基,非糖基化,第69位和101位兩個(gè)半胱氨酸形成分子內(nèi)二硫鍵。rHu TNF-α分子量為17kDa。小鼠TNF-α前體為235氨基酸殘基,信號肽79氨基酸殘基,成熟的小鼠TNF-α(rMuTNF-α)分子量為17kDa,由156個(gè)氨基酸殘基組成,第69位和100位兩個(gè)半胱氨酸形成分子內(nèi)二硫鍵,有一個(gè)糖基化點(diǎn),但糖基化不影響其生物學(xué)功能。rHu TNF-α與rMu TNF-α有79%氨基酸組成同源性,TNF-α的生物學(xué)作用似無明顯的種屬特異性。zui近有人報(bào)道通過基因工程技術(shù)表達(dá)了N端少2個(gè)氨基酸(Val、Arg)的155氨基酸人TNF-α,具有更好的生物學(xué)活性和抗腫瘤效應(yīng)。此外,還有用基因工程方法,將TNF-α分子氨基端7個(gè)氨基酸殘基缺失,再將8Pro、9Ser和10Asp改為8Arg、9Lys和10Arg,或者再同時(shí)將157Leu改為157Phe,改構(gòu)后的TNF-α比天比天然TNF體外殺傷L929細(xì)胞的活性增加1000倍左右,在體內(nèi)腫瘤出血壞死效應(yīng)也明顯增加。TNF-α和β發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)的天然形式是同源的三聚體。
(2)人 和小鼠TNF-β基因分別定位于第6和第17號染色體。HuTNF-β分子由205個(gè)氨基酸殘基組成,含34氨基酸殘基的信號肽,成熟型Hu TNF-β分子為171個(gè)氨基酸殘基,分子量25kDa。rHu TNF-β分子由202氨基酸殘基組成,包括33個(gè)氨基酸殘基的信號肽,成熟分子169個(gè)氨基酸殘基,與Hu TNF-β有79%的同源性。Hu TNF-β與Hu TNF-αDNA同源序列達(dá)56%,氨基酸水平上同源性為36%。
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