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產品簡介
| 供貨周期 | 兩周 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
|---|
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 |
E2 Select Ubiquitin Conjugation Kit重組人泛素結合酶篩選試劑盒 | 20440ES10 | 10 T |
產品簡介
泛素化是通過三個酶促步驟實現的。在ATP依賴的過程中，泛素激活酶(E1)催化與泛素形成活性硫酯鍵，然后轉移到泛素載體蛋白的活性位點半(E2)。泛素級聯對特定底物蛋白的選擇性依賴于E2結合酶(細胞中包含的相對較少)和泛素-蛋白連接酶(E3)之間的相互作用，迄今為止已經鑒定出600多種這種酶。E3s是一個大的，多樣化的蛋白質組，其特征是幾個確定的基序之一。這些包括HECT(與e6相關蛋白c端同源)，RING(真正有趣的新基因)或U-box(沒有Zn2+結合配體的完整補充的修飾的RING基序)結構域。而HECT E3s在泛素化過程中具有直接的催化作用，RING和U-box E3s促進蛋白質泛素化。 后兩種E3類型充當適配器類分子。 它們使E2和底物足夠接近，從而促進底物的泛素化。雖然許多RING-type e3，如MDM2和c-Cbl，可以單獨發揮作用，但其他一些是作為更大的多蛋白復合體的組成部分，如后期促進復合體。綜上所述，這些多面的特性和相互作用使E3s能夠利用泛素-蛋白酶體系統，在真核生物的所有細胞中提供一種強大而具體的蛋白質清除機制。該篩選試劑盒集合了11種常用E2結合酶，可以篩選具有E3連接酶活性的蛋白所匹配的E2酶.
產品性質
來源(Source) | E.coli |
分子量(Molecular Weight) | Ubiquitin約10 kDa，E1酶大約116 kDa，E2s11種，E3酶大約102kDa,底物蛋白大約40.7kDa。 |
外觀(Physical Appearance) | 泛素蛋白凍干粉，其他是液體； |
標簽(Tag) | None |
純度(Purity) | > 95% by SDS-PAG |
儲存液(Stock) | 0.88 mg/ml (25 µM) in 50 mM HEPES pH 7.5, 200 mM NaCl, 10% Glycerol. |
濃度(Concentration) | 見管外標簽 |
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 規格 |
20440-A | 10 × Reaction Buffer | 200 μL |
20440-B | 10 × E1 Enzyme (His-tag) | 200 μL |
20440-C | 5 × Ubiquitin （凍干粉中加 400μL 水） | 400 μL |
20440-D | 10 × Mg2+ -ATP | 200 μL |
20440-E | 10 × E3 Ligase Itch (Positive control) | 20 μL |
20440-F | 20 × S5a substrate (Positive control) | 20 μL |
20440-G | 20 × UBE2R1/UbcH3/Cdc34 (2R1) | 15 μL |
20440-H | 20 × UBE2N/UBE2V2 Complex (2N/2V2) | 15 μL |
20440-I | 20 ×UBE2D1/UbcH5a (D1） | 15 μL |
20440-J | 20 × UBE2D2/UbcH5b (D2) | 15 μL |
20440-K | 20 ×UBE2D3/UbcH5c (D3) | 15 μL |
20440-L | 20 × UBE2L3/UbcH7 (2L3) | 15 μL |
20440-M | 20 × UBE2K/E2-25K(2K) | 15 μL |
20440-N | 20 × UBE2C/UbcH10(2C) | 15 μL |
20440-O | 20 × UBE2H/UbcH2(2H) | 15 μL |
20440-P | 20 × UBE2L6/UbcH8(2L6) | 15 μL |
20440-Q | 20 × UBE2E1/UbcH6(E1) | 15 μL |
反應體系配制(20 μL)
組分 | 體積 |
ddH2O | Up to 20 μL |
10 × Reaction Buffer | 2 μL |
10 × E1 Enzyme | 2 μL |
5 × Ubiquitin | 4 μL |
10 × ATP-Mg | 2 μL |
20 × E2 Enzyme | 1 μL |
E3 Ubiquitin Ligase* | 2 μL |
Substrate(可選)* | 1 μL |
備注： *組分，使用者自己準備，E3 Ubiquitin Ligase 可重組表達或從細胞裂解液中純化，Substrate (可選) not required for analyzing E3 Auto-Ubiquitination.
陽性對照反應體系(20 μL)
組分 | 體積 |
ddH2O | to 20 μL |
10 × Reaction Buffer | 2 μL |
10 × E1 Enzyme | 2 μL |
5 × Ubiquitin | 4 μL |
10 × ATP-Mg | 2 μL |
20 × E2 Enzyme | 1 μL |
10 × E3 Ligase Itch (Positive control) | 2 μL |
20 × S5a substrate (Positive control) | 1 μL |
反應條件
37℃孵育(30min~2h，如果效果不明顯可增加反應時間12h)，建議使用PCR儀或金屬浴.
結果檢測
取樣品20 μL加入5 μL的5×SDS-PAGE Buffer，加熱樣品95 ℃ 5min，隨后使用還原性(含DTT)上樣緩沖液進行SDS-PAGE電泳分析；
選擇E3 Ubiquitin Ligase、泛素、Substrate抗體進行Western Blot分析.
儲存條件
-25~-15℃保存
注意事項
1. 避免反復凍融。
2. 本產品僅作科研用途。
3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20240227
