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INTERFERin® siRNA/miRNA體外轉(zhuǎn)染試劑
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 產(chǎn)品型號(hào)
- Polyplus 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：3482更新時(shí)間：2023-03-15 09:02:09
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 一周 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
產(chǎn)品介紹
INTERFERin®in vitro siRNA/miRNA transfection reagent
INTERFERin® siRNA/miRNA體外轉(zhuǎn)染試劑
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
INTERFERin®in vitro siRNA/miRNA transfection reagent INTERFERin® siRNA/miRNA體外轉(zhuǎn)染試劑 | 409-01 | 0.1 mL | 655.00 |
409-10 | 1 mL | 3135.00 |
產(chǎn)品描述
INTERFERin®是Polyplus公司提供的一款非脂質(zhì)體PEI陽(yáng)離子、兩性分子轉(zhuǎn)染試劑，專(zhuān)門(mén)為將siRNA/miRNA轉(zhuǎn)染到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中而開(kāi)發(fā)。這種轉(zhuǎn)染試劑包裹siRNA或miRNA形成陽(yáng)離子復(fù)合物，該復(fù)合物與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白聚糖相互作用吸附在細(xì)胞表面，通過(guò)內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞，形成內(nèi)含體。該轉(zhuǎn)染試劑具有質(zhì)子海綿的作用，能夠吸收溶酶體中的H+，質(zhì)子的不斷流入，導(dǎo)致復(fù)合體腫脹破裂，從而使外源siRNA或miRNA釋放到細(xì)胞質(zhì)中。
INTERFERin®可在廣泛的細(xì)胞系中，實(shí)現(xiàn)1 nM的siRNA超過(guò)90%的表達(dá)效率，避免了脫靶效應(yīng)。適用于多種細(xì)胞轉(zhuǎn)染，包括Hela、MCF-7、NIH-3T3等貼壁細(xì)胞；對(duì)于難以轉(zhuǎn)染的懸浮細(xì)胞系，如K562或THP-1細(xì)胞，siRNA終濃度為5nM時(shí)，可達(dá)到80%的沉默效率；同時(shí)還可以轉(zhuǎn)染原代人成纖維細(xì)胞和原代人肝細(xì)胞等，可達(dá)到80%的沉默效率。除此之外，也可根據(jù)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系、核酸種類(lèi)、轉(zhuǎn)染時(shí)間等，登錄Polyplus公司的網(wǎng)///址，搜索該產(chǎn)品引文數(shù)據(jù)庫(kù)。Polyplus數(shù)據(jù)庫(kù)提供了400多種的轉(zhuǎn)染條件數(shù)據(jù)可供參考，Polyplus：w/w/w.polyplus transfection.c/o/m.
運(yùn)輸與保存方法
冰袋（wet ice）運(yùn)輸。產(chǎn)品4 ºC保存，一年有效。不可冷凍！
注意事項(xiàng)
1）整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程使用無(wú)RNA酶和無(wú)熱原性的材料，如離心管、槍頭、緩沖液。
2）轉(zhuǎn)染前，確保siRNA/miRNA是經(jīng)過(guò)PAGE純化和脫鹽處理過(guò)的，高純度的siRNA或者miRNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。
3）INTERFERin®轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)該在4 ºC保存，要注意避免多次反復(fù)長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)蓋，否則可能會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染試劑揮發(fā)，降低轉(zhuǎn)染效率。
4）轉(zhuǎn)染前一天，確保接種貼壁細(xì)胞密度在30%-50%，對(duì)于一些小細(xì)胞和生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞，接種密度可適當(dāng)擴(kuò)大2倍。
5）轉(zhuǎn)染前，確保siRNA/miRNA基因沉默表達(dá)不會(huì)影響細(xì)胞活力。
6）該產(chǎn)品只適合體外轉(zhuǎn)染，不能用于體內(nèi)轉(zhuǎn)染。
操作流程
一．貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染（以24孔板和轉(zhuǎn)染1 nM siRNA為例，其他培養(yǎng)板加樣體積請(qǐng)參考表1）
為了提高轉(zhuǎn)染效率，建議在轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞，接種細(xì)胞密度建議30%-50%，建議初次使用時(shí)設(shè)置梯度進(jìn)行優(yōu)化//佳使用量。
【注】：由于靶基因、細(xì)胞類(lèi)型、siRNA效價(jià)、靶mRNA的半衰期和靶蛋白的周轉(zhuǎn)率等因素，均會(huì)影響siRNA的轉(zhuǎn)染效率。建議選取siRNA濃度在1 nM到10 nM之間。轉(zhuǎn)染試劑的體積應(yīng)根據(jù)siRNA濃度和培養(yǎng)皿的大小進(jìn)行調(diào)整，請(qǐng)參見(jiàn)下表1。
表1 siRNA終濃度為1 nM時(shí)，轉(zhuǎn)染試劑、培養(yǎng)基的用量參考值
培養(yǎng)皿 | siRNA物質(zhì)的量(pmoles) | 每孔siRNA的含量（ng） | INTERFERin®轉(zhuǎn)染試劑體積（µL） | siRNA-INTERFERin®復(fù)合物的體積V1（µL） | *培養(yǎng)基的體積V2 | 終體積（V=V1+V2） |
96孔板 | 0.17 | 2.4 | 0.75 ± 0.5 | 50 | 125 µL | 175 µL |
24孔板 | 0.6 | 8.4 | 2 ± 1 | 100 | 500 µL | 600 µL |
12孔板 | 1.2 | 17 | 4 ± 2 | 200 | 1 mL | 1.2 mL |
6孔板 | 2.2 | 31 | 8 ± 4 | 200 | 2 mL | 2.2 mL |
25 cm2培養(yǎng)瓶 | 4.4 | 62 | 15 ± 5 | 400 | 4 mL | 4.4 mL |
75 cm2培養(yǎng)瓶 | 10.5 | 147 | 40 ± 10 | 500 | 10 mL | 10.5 mL |
表2 siRNA終濃度為10~50 nM時(shí)，轉(zhuǎn)染試劑、培養(yǎng)基的用量參考值
培養(yǎng)皿 | INTERFERin®轉(zhuǎn)染試劑體積（µL） | siRNA-INTERFERin®復(fù)合物的體積V1（µL） | *培養(yǎng)基的體積V2 | 終體積V（V=V1+V2） |
96孔板 | 1 ± 0.5 | 50 | 125 µL | 175 µL |
24孔板 | 3 ± 1 | 100 | 500 µL | 600 µL |
12孔板 | 6 ± 2 | 200 | 1 mL | 1.2 mL |
6孔板 | 12 ± 4 | 200 | 2 mL | 2.2 mL |
25cm2培養(yǎng)瓶 | 20 ± 5 | 400 | 4 mL | 4.4 mL |
二．懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染（以24孔板和轉(zhuǎn)染5 nM siRNA為例，其他培養(yǎng)板加樣體積請(qǐng)參考表4）
接種細(xì)胞
1.為了優(yōu)化懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染條件，與貼壁細(xì)胞相比，需要降低懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)基的體積。根據(jù)培養(yǎng)皿大小和完整培養(yǎng)基的體積，推薦的接種懸浮細(xì)胞的數(shù)量如下表3所示。
表3 轉(zhuǎn)染當(dāng)天，根據(jù)培養(yǎng)皿的大小，接種懸浮細(xì)胞數(shù)量參考值
培養(yǎng)皿 | 每孔接種細(xì)胞懸浮液體積（μL） | 轉(zhuǎn)染當(dāng)天接種細(xì)胞數(shù) |
384孔板 | 25 | 5 ×103~1×104 |
96孔板 | 50 | 1×104~ ×104 |
24孔板 | 200 | 1×105 ~ 2×105 |
12孔板 | 500 | 2×105 ~ 4×105 |
6孔板 | 1000 | 5×105 ~ 2×106 |
25 cm2培養(yǎng)瓶 | 2000 | 2×106~ 5×106 |
2.按照以下體系配制siRNA-INTERFERin®復(fù)合物：
1）對(duì)于每孔細(xì)胞，使用100 μL無(wú)血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基）稀釋21 ng siRNA (1.5 pmols)，混勻。
2）向100 μL的siRNA中加入4 μL的轉(zhuǎn)染試劑，立刻旋渦10秒，充分混勻。
3）在室溫孵育15 min，使得形成siRNA-INTERFERin®復(fù)合物。
【注】：孵育時(shí)間不要超過(guò)30 min
4）在每孔200 μL細(xì)胞懸浮液中，加入100 μL的siRNA-INTERFERin®復(fù)合物，輕輕混勻。終體積為300 µL，siRNA終濃度為5 nM。
5）37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4-6 h后，再加入700 µL*培養(yǎng)基，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)板使其混勻。
6）繼續(xù)放入培養(yǎng)箱中孵育，直至目的基因表達(dá)。建議一般mRNA表達(dá)水平通常在24-72 h，蛋白表達(dá)水平在48-96 h。
【注】：為了優(yōu)化內(nèi)源性基因沉默，建議選取siRNA濃度在5 nM到20 nM之間。轉(zhuǎn)染試劑的體積應(yīng)根據(jù)siRNA濃度和培養(yǎng)皿的大小進(jìn)行調(diào)整，請(qǐng)參見(jiàn)下表4。
表4 siRNA濃度為5 nM時(shí)，在懸浮細(xì)胞中的參考值
培養(yǎng)皿 | 懸浮細(xì)胞的體積 | siRNA的濃度(pmoles) | 每孔siRNA的含量（ng） | 轉(zhuǎn)染試劑體積（µL） | siRNA-INTERFERin®復(fù)合物的體積（µL） | 轉(zhuǎn)染4-6h后另加入培養(yǎng)基的體積 |
384孔板 | 25 µL | 0.25 | 3.75 | 1 ± 0.5 | 25 | 0 µL |
96孔板 | 50 µL | 0.5 | 7.5 | 2 ± 1 | 50 | 100 µL |
24孔板 | 200 µL | 1.5 | 21 | 3 ± 2 | 100 | 700 µL |
12孔板 | 500 µL | 3.5 | 49 | 6 ± 4 | 200 | 1 mL |
6孔板 | 1 mL | 6 | 84 | 10 ± 8 | 200 | 2 mL |
25cm2培養(yǎng)瓶 | 2 mL | 12 | 168 | 15 ±10 | 400 | 4 mL |
表5 懸浮細(xì)胞中siRNA濃度、轉(zhuǎn)染試劑的用量參考值
siRNA的終濃度/孔 | 培養(yǎng)皿 | INTERFERin®轉(zhuǎn)染試劑的體積/孔 |
1 ~ 20 nM
| 386孔板 | 1 ± 0.5 µL |
96孔板 | 2 ± 1 µL | |
24孔板 | 3 ± 2 µL | |
6孔板 | 10 ± 8 µL | |
20 ~ 50 nM | 386孔板 | 1.5 ± 0.5 µL |
96孔板 | 3 ± 1 µL | |
24孔板 | 5 ± 2 µL | |
6孔板 | 15 ± 8 µL |
三．miRNA轉(zhuǎn)染操作流程
該轉(zhuǎn)染試劑也適合轉(zhuǎn)染miRNA，轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的具體操作請(qǐng)參考siRNA的操作流程。
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
jetPRIME®in vitro DNA & siRNA transfection reagent | 114-01 | 0.1 mL | 835.00 |
114-15 | 1.5 mL | 6395.00 | |
jetOPTIMUS® in vitro DNA transfection reagent | 117-01 | 0.1 mL | 835.00 |
117-15 | 1.5 mL | 6855.00 | |
jetPEI®DNA transfection, HTS application | 101-10N | 1 mL | 4565.00 |
INTERFERin®in vitro siRNA/miRNA transfection reagent | 409-01 | 0.1 mL | 655.00 |
409-10 | 1 mL | 3135.00 |
