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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 25 T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 40273ES25 | 應用領域 | 生物產業 |
| 主要用途 | 檢測細胞凋亡提供了有效的工具 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格 |
SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells SuperView™ 488 Caspase-3活細胞分析試劑盒 | 40273ES25 | 25 T | 783.00 |
40273ES60 | 100 T | 2583.00 |
產品描述
活細胞分析試劑盒包含SuperView 488 Caspase-3底物和Ac-DEVD-CHO Caspase-3/7抑制劑。SuperView 488 Caspase-3 Substrate為基于Caspase-3/7活力檢測細胞凋亡提供了有效的工具，適用于熒光顯微觀察和流式細胞儀分析。
相較于其它基于（FLICA）分析的 Caspase 的熒光底物或熒光抑制，試劑盒內提供的Substrate 檢測Caspase-3/7 活性的同時不會抑制完整細胞的凋亡過程。Substrate由耦合Caspase-3/7 DEVD識別序列的熒光DNA染料組成。Substrate 初無熒光，其會穿過細胞膜進入細胞質。在凋亡細胞中Caspase-3/7剪切Substrate釋放高親和性的DNA 染料，這種染料遷移到細胞核標記DNA 并發出明亮的綠色熒光。Substrate 是雙功能的，既可以檢測 Caspase-3/7 活性，又能可視化細胞核在細胞凋亡進行中的形態學變化。SuperView 染色可以進行甲醛固定并兼容后續免疫染色實驗。
光譜特性SuperView : Ex/Em=500/530nm（with DNA）
產品組分
編號 | 組分名稱 | 產品編號/規格 | |
40273ES25（25T） | 40273ES60（100T） | ||
40273-A | SuperView 488 Caspase-3 Substrate, 0.2 mM in DMSO | 125 µL | 500 µL |
40273-B | Caspase-3 inhibitor Ac-DEVD-CHO, 2 mM in DMSO | 20 µL | 100 µL |
運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。儲存于4ºC，至少可以儲存6個月。
注意事項
1、細胞可用Hoechst 33342 染料（推薦濃度1 μM）共染，使細胞核產生藍色熒光染色（Ex/Em=346/460 nm）。
2、SuperView 488 染料可用甲醛固定，但與甲醇固定不兼容。
3、經甲醛固定的SuperView 488染色細胞可用0.1% TritonX-100處理后行后續染色，但這樣處理后的染色亮度可能會減弱。
4、操作時請采取防護措施，穿防///護服、戴一次性手套等。
使用方法
- 實驗優化
下面提供的實驗步驟根據終點法檢測制度。SuperView 488 Substrate 可進行細胞長時間孵育過程研究。細胞密度、底物濃度和抑制劑濃度可能需要優化。推薦底物濃度1-10 μM之間。細胞可在培養基、PBS或其他的緩沖液中孵育底物。對于貼壁細胞，建議更換新鮮含有底物的培養基，以防背景的不均一性。底物孵育后換液或洗滌細胞等操作可自由選擇。
2. 對照設定
推薦設定以下對照：
A. 陰性對照：不誘導凋亡的細胞
B. 陽性對照：誘導凋亡的細胞
C. 抑制劑對照：誘導細胞凋亡同時（或提*-30 min）孵育Caspase-3/7抑制劑，后再添加SuperView 488 Caspase-3底物。
3. 抑制劑對照
試劑盒中所提供的Caspase-3/7 抑制劑 Ac-DEVD-CHO 可用來確認Caspase-3/7 依賴于SuperView 488 的熒光信號。對于抑制劑對照，抑制劑的終濃度應至少是底物濃度的2倍（例如當使用5 μM SuperView 488 底物時，Ac-DEVD-CHO濃度為 10 μM）。添加底物前在室溫下孵育Ac-DEVD-CHO 15-30 min，加入底物后，孵育液中繼續保留抑制劑。Ac-DEVD-CHO 是可逆的競爭性抑制劑。對于某些細胞類型有效的Caspase-3/7 抑制劑需要使用不可逆的抑制劑，如Z-DEVD-FMK，或需要在凋亡誘導之前或誘導過程中添加抑制劑。
4. 流式細胞儀分析
4.1 選擇合適的方法誘導細胞凋亡，未經處理的細胞樣本作為對照。
4.2 對于貼壁細胞，實驗前先用胰蛋白酶或其他方法消化細胞。
4.3 用細胞培養基或合適緩沖液重懸細胞，使細胞密度達到106個/mL數量級。
4.4 添加200 μL 細胞懸液至流式細胞試管。
4.5 抑制劑對照樣本，用Ac-DEVD-CHO 處理細胞（見上文）。
4.6 200 μL細胞懸液中加5 μL 0.2 mM 的Substrate并立即混勻使底物濃度為5 μM。不同類型細胞///佳底物濃度可能不同，需進一步優化。
4.7 室溫避光孵育15-30 min。
4.8 加入300 μL細胞培養基或PBS，使用流式細胞儀分析，選擇檢測綠色熒光的通道（激發/發射：485/515 nm）。
5. 熒光顯微鏡觀察
5.1 選擇合適的方法誘導細胞凋亡，未經處理的細胞樣本作為對照。
5.2 抑制劑對照樣本，用Ac-DEVD-CHO 處理細胞（見上文）。
5.3 用含5 μM Substrate 的新鮮培養基或PBS對細胞進行換液（見試驗優化）。對于抑制劑對照組，抑制劑與底物一同孵育。
5.4 室溫孵育30 min 或更長時間。
5.5 PBS或其它緩存液清洗細胞，熒光顯微鏡觀察細胞，使用觀察綠色熒光的濾片（激發/發射：485/515 nm）。
6. 熒光酶標儀檢測
6.1 將貼壁細胞生長在黑色96孔板中；對于懸浮細胞，調整密度至106個/mL，每孔加入0.2 mL細胞懸液。
6.2 選擇合適的方法誘導細胞凋亡，未經處理的細胞樣本作為對照。（注意：細胞可能在管或瓶中處理，然后轉移到 96孔檢測板。）
6.3 抑制劑對照樣本，用 Ac-DEVD-CHO 處理細胞（見上文）。
6.4 對于懸浮細胞，直接添加Substrate 混勻。對于貼壁細胞，用含有5 μM Substrate的新鮮培養基或PBS對細胞進行換液（見試驗優化）。對于抑制劑對照組，抑制劑與底物一同孵育。
6.5 細胞可以在含有Substrate 的培養基中直接觀察。
6.6 對于懸浮細胞，輕輕震蕩重懸細胞。熒光酶標儀設置激發波長488 nm和發射波長520 nm。建議貼壁細胞使用底部閱讀方式。貼壁細胞密度的變化可能導致不準確的讀數。
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HB201204
