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產品信息
 

產品描述
 

增強型ECL化學發光檢測試劑盒用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶（HRP）的抗體及其關聯的抗原。其原理是，蛋白質或核酸在電泳后轉移到印跡膜上，以一抗及HRP標記的二抗結合膜上的目的蛋白，或以HRP標記的探針直接或間接結合膜上的核酸。洗膜后用本產品配制的ECL工作液，室溫孵育膜數分鐘，將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定于X光片曝光暗盒。然后轉入暗室將X光膠片壓在膜上曝光數秒到數小時，顯影定影后蛋白質或核酸條帶可清晰顯示在X光膠片上。

本試劑盒采用了*的發光底物系統，降低曝光背景的同時引入新型的氧化劑，大大提高試劑盒的穩定性，使其在室溫能穩定放置一年。除用于X光片，還可直接使用熒光CCD掃描，主要用于WB檢測以及化學發光免疫檢測系統。

產品組分
 

運輸與保存方法
 

常溫運輸。

頻繁使用可置于室溫保存，一年穩定；長期不用，建議置于4 ºC保存延長效期。【注】：A液（36222-A）需避光保存！

操作方法（以X光膠片為例）

1. 執行常規電泳、轉膜、HRP標記抗體或者HRP標記核酸探針孵育、洗膜。

【注】：ECL發光液是HRP的顯色底物，因此檢測系統終必須基于HRP酶標記抗體或者核酸探針。

2. 后1次洗膜的同時，新鮮配制發光工作液（推薦100-200 μL發光液/cm²膜）：分別取等體積的A液和B液，混勻備用。

【注】：取A液和B液一定要用不同的槍頭；另建議立即使用工作液，室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有降低。

3. 用平頭鑷取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液，勿使膜*干燥。用移液器將工作液加到膜上，使之充分接觸。室溫孵育1-2 min，準備立即壓片曝光。

4. 用平頭鑷子夾起膜，膜的下緣輕輕接觸吸水紙，去除膜上多余的液體，留下少量工作液，不可讓膜*干燥。

5. 在X光膠片暗盒內表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將印跡膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來*包裹印跡膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發光工作液。用膠帶將覆蓋印跡膜的保鮮膜固定在暗盒內，蛋白帶面向上。

6. 暗房內取一張X光膠片至于包裹的膜上，壓片，曝光30 sec-2 min，顯影定影沖洗。【注】：曝光時間需根據曝光強度做相應的調整。若是背景過高，可使用兩張X光膠片同時壓片。

其他曝光方法

如果使用CCD拍照：可以將膜放置于工作液中，開機后按照使用說明，將膜取出，進行拍照。另外，也可以根據情況，調整機器測量參數，提高信噪比。

注意事項
 

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2）轉膜、封閉、孵育都需要避免氣泡，另外戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干凈。

3）長時間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關系。曝光不足則條帶模糊。

4）某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光，應選擇高質量保鮮膜。

5）避免將多張膜置于同一個洗膜盒內洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。

6）使用肉眼可見的預染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。

7）使用生物素-親和素系統，避免使用牛奶封閉，可能會導致背景過高。

8）金屬氧化物顆粒可能會造成膜上出現顆粒狀斑點，避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子，建議使用塑料的平頭鑷子。

9）（NaN₃）能抑制HRP活性，若回收HRP標記探針或者抗體應避免使用NaN₃，如必需使用勿超過0.01%。
10）本品無特殊毒性，按普通化學品處理。

問題與解決方案
 

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HB181130