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碘化丙啶染液 PI(Propidium Iodide)
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準- 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：1030更新時間：2023-03-01 14:26:06
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- www.yeasen.com
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 40710ES03 |
|---|---|---|---|
| 應用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
產(chǎn)品介紹
碘化丙啶染液 PI(Propidium Iodide)(1mg/mL)
產(chǎn)品描述
碘化丙啶染液 PI(Propidium Iodide)(1mg/mL)是一種常用的細胞核熒光染料，作為一種溴化乙錠（EB）的類似物，能夠嵌入堿基之間實現(xiàn)與DNA結(jié)合。這種結(jié)合沒有或者幾乎無序列傾向性，大約每4-5個DNA堿基對結(jié)合一個染料。PI也能與RNA結(jié)合，需要用核酸酶處理來區(qū)分DNA和RNA染色。水溶液中PI的zui大激發(fā)/發(fā)射波長是493/636nm。一旦與核酸結(jié)合，熒光信號明顯增強20-30倍，zui大激發(fā)波長向紅色波段遷移~30-40nm，zui大發(fā)射波長向藍色波段遷移~15nm，從而使其zui大激發(fā)/發(fā)射波長變?yōu)?/span>535/617nm。PI的摩爾吸光系數(shù)相對比較低，但是其具有足夠大的斯托克司頻移來同時檢測核酸DNA和熒光標記抗體，只需要使恰當?shù)臑V片。PI適用于熒光顯微鏡，共聚焦顯微鏡，流式細胞儀以及熒光計分析。
PI不能穿透細胞膜而被排斥在活細胞外，但是可以穿過破損的細胞膜而對核染色。利用這一特性，通常與Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活細胞熒光探針一起使用，同時對活細胞和死細胞染色和鑒定，用于細胞凋亡相關(guān)的研究。也可以用作多重熒光染色的復染劑，兼容于各種細胞標記技術(shù)，包括直接或者間接的熒光抗體檢測，mRNA原位雜交，細胞結(jié)構(gòu)特異性的熒光探針檢測法以及組織染色。PI的單獨染色也可以進行細胞周期的檢測。
本品是溶于水的PI儲存液，濃度為1mg/ml，只需用合適的緩沖液稀釋到工作液即可。
產(chǎn)品性質(zhì)
英文同義名（English synonym） | 2,7-Diamino-9-phenyl-10 (diethylaminopropyl)-phenanthridium iodide methiodide. |
CAS號（CAS NO.） | 25535-16-4 |
分子式（Formula） | C27H34I2N4 |
分子量（Molecular Weight） | 668.4 |
純度（Purity） | ≥95% by HPLC |
溶解性（Solubility） | 溶于水（1mg/ml） |
熒光光譜 （Fluorescence Spectral） | 水溶液，PI的Ex/Em= 493/636nm；PI-核酸的Ex/Em= 535/617nm；熒光可用氙氣燈，泵弧燈或者488nm氬離子激光激發(fā)。通常情況下，用流式細胞儀的FL2通道檢測。 |
結(jié)構(gòu)式（Structure） |
|
運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。4 oC避光保存，至少6個月穩(wěn)定。
使用方法
貼壁細胞復染步驟（熒光顯微鏡檢測）
樣本準備：根據(jù)自身樣本選擇合適的步驟固定細胞。PI染色一般在其它染色完成后再進行。PI復染要求細胞經(jīng)透化處理。
RNase酶處理：若樣本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，則需要進行RNase處理。若樣本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；b，將本品置于含有100 µg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20min；c，用2×SSC溶液清洗樣本3次，每次1min。
復染：a，于2X SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；b，直接用2×SSC稀釋1mg/ml（1.5 mM）PI儲存液 1:3000，得到500 nM的PI工作液。通常添加300µL染液足夠用于一個蓋玻片細胞制片。染色1-5min。c，2×SSC清洗幾次，流盡多余的緩沖液后，加入抗淬滅劑封片（比如Yeasen，貨號：36308ES08）。d，選擇熒光顯微鏡的合適濾片進行觀察。
懸浮細胞復染步驟（流式細胞儀檢測）
樣本準備：根據(jù)自身樣本選擇合適的步驟固定細胞。或者使用如下的步驟：
收集一定量的細胞，密度約 2 × 105 ~1 × 106。離心收集細胞，吸掉上清液，用手輕彈管壁就剩下
的液體重懸細胞。之后加入1ml常溫存放的PBS；
將所有的重懸細胞轉(zhuǎn)移到4ml于-20oC預冷的無水乙醇，在高速渦旋混勻的同時一邊用槍緩慢的添
加細胞懸液到乙醇內(nèi)。于-20oC乙醇中固定5-15min。
離心收集細胞，除去乙醇。用手輕彈管壁以彈松細胞后，加入5ml室溫的PBS。允許細胞水化15min；
復染
用染色液（100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2 , 0.5 mM MgCl2 , 0.1% Nonidet® P-40）稀
釋1mg/ml（1.5 mM）PI儲存液 1:500，得到3 µM的PI工作液。1ml的PI染色液足夠用于每個細胞樣本的檢測。注：工作液的使用濃度可以根據(jù)自身實驗體系調(diào)整，也可以直接使用PBS，HBSS等緩沖液直接稀釋PI儲存液到需要的濃度。
樣本制備的zui后一步后離心收集細胞，去除上清，用手輕彈管壁以彈松細胞后，加入1ml的PI染
色工作液。室溫孵育15min后，流式細胞儀進行細胞分析。若用流式顯微鏡觀察，則需要離心樣本，去除上清并重懸細胞在新鮮的緩沖液中。吸取1滴懸液到載玻片上，蓋上蓋玻片后觀察。
染色質(zhì)FISH復染步驟
樣本準備：根據(jù)標準步驟制備樣本。復染之前的zui后一步用去離子水清洗樣本以去除玻片上殘留的緩沖鹽。室溫晾干。此步驟有助于減少非特異性的背景染色。
復染
工作液的配制：用PBS緩沖液直接稀釋1 mg/ml（1.5 mM）的PI儲存液1:1000，得到1.5 µM的
PI染色工作液。滴加300µL的工作液直接到樣本。有必要的話，工作液內(nèi)加入新鮮制備的RNase A（終濃度：10 µg/mL）。可使用塑料蓋玻片均勻分布染液在載玻片上。室溫避光條件下孵育樣本30 min；如果加入RNase則37oC孵育。
去除蓋玻片，用PBS或去離子水清洗以除去沒有結(jié)合的染料；
用吸水紙巾圍繞著樣本周圍吸取殘留液體，蓋上玻璃蓋玻片后用石蠟或者指甲油封住蓋玻片邊緣。也可用抗熒光淬滅劑進行封片。
- 選擇熒光顯微鏡的合適濾片進行觀察。
注意事項
碘化丙啶（PI）是已知的誘變劑，因此PI溶液在丟棄之前需要先經(jīng)過活性炭處理。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
相關(guān)產(chǎn)品
40710ES03 | PI (Propidium iodide) 碘化丙啶染液（1mg/ml） | 1ml |
40732ES03 | Hoechst 33342 染液（1mg/ml） | 1ml |
40744ES01 | Hoechst 33342/PI 雙染試劑盒 | 1Kit |
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40747ES01 | Calcein-AM/PI檢測試劑盒 | 1Kit |
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