小鼠基質金屬蛋白酶13試劑盒樣本實驗準備
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天就進行
檢測的樣本，及時儲存在4℃備用。對于隔天再檢測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃備用，有條件的，-70℃凍存備用。標本應避免反復凍融。
液體類標本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

小鼠基質金屬蛋白酶13試劑盒

英文名稱：Mouse matrix metalloproteinase 13,MMP-13 ELISA KIT

貨號：HD-30087K

性狀：液體 

規格： 96T 

種屬：Mouse 

樣本類型： serum, plasma, tissue homogenates

所需樣本體積： 50-100ul

檢測波長： 450 nm

反應時間： 1-5h

檢測方法：ELISA酶聯免疫法

檢測范圍： 詳見說明書 

靈敏度： 詳見說明書 

小鼠基質金屬蛋白酶13試劑盒用途： For research use only. Not for diagnostic or therapeutic

Storage and validity

1．Storage：  2-8℃.

2．validity： six months.

運輸條件：

低溫運輸，用干冰或者冰袋低溫運輸。 

常見的問題及解答

問：抗原檢測出的分子量比資料上的大，是怎么回事？

答：a）抗原形成了二聚體。增多巰基乙醇量，煮沸變性時間延長，可以打開二聚體。b）蛋白本身的修飾如：糖基化，磷酸化等

問：蛋白轉移不到膜上，但膠上有，同時Marker 轉上去了，為什么？

答：可能是：a）樣品濃度過低；b）轉移時間不夠，。

問：磷酸化抗體的檢測樣本制備時是否一定要加NaF等？

答：NaF是一種廣譜磷酸化酶的抑制劑，一般加。但是不加也可以，大部分時候是不用加的。

問：要驗證某個細胞上有無該蛋白的存在，需要做免疫組化和western blot試驗嗎？做這兩個試驗時的一抗和二抗可以共用嗎？

答：①免疫組化可以用來進行定位，但是不能精確定量，而且有時會有假陽性，不易與背景區分；Western blot可以特異性檢測某個蛋白質分子，進行定量，但是不能定位。

②兩種實驗的一抗有時候不能通用，公司的產品說明一般都會說明可以進行什么實驗，在免疫組化時，是否適合石蠟切片或者冰凍切片。

問：做Western Blot時，提取蛋白后凍存（未加蛋白酶抑制劑），用的博士德的一抗，開始還有點痕跡，現在越來越差，上樣量已加到120μg，換了個santa cloz的一抗仍不行。是什么原因？蛋白酶抑制劑單加PMSF行嗎？

答：懷疑是樣品問題，可能是：1，樣品不能反復凍融；2，樣品未加蛋白酶抑制劑。同時，建議檢查Western Blot過程，提高一抗濃度。對于加蛋白酶抑制劑來說，一般加PMSF就可以了，能多加幾中種蛋白酶抑制劑。

問：細胞水平要做western blot，多少細胞提的蛋白夠做western blot？ 

答：一般5×10^6就足夠了

問：同一樣品能同時提RNA又提蛋白么？這樣對western blot有無影響？ 

答：能，沒有問題。

問：同一蛋白樣品能同時進行兩種因子的Western Blot檢測嗎？

答：當然可以，有的甚至可以同時測幾十種樣品。

問：如果目標蛋白是膜蛋白或是胞漿蛋白，操作需要注意什么？

答：如果是膜蛋白和胞漿蛋白，所用的去垢劑要溫和得多，這時加上NaF去抑制磷酸化酶的活性。

問：我的樣品的蛋白含量很低，每微升不到1微克，但是在轉膜時經常會發現只有一部分蛋白轉到了膜上，就是在轉膜后染膠發現有的孔所有的蛋白條帶都在，只是顏色變淡了，有什么辦法可以解決？

答：你可以加大上樣量，沒有問題，還有轉移時你可以用減少電流延長時間，加20％甲醇。

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