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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
詳細(xì)介紹
一、原理
糧食飼料版T2毒素ELISA檢測(cè)試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法定量檢測(cè)樣品中T2毒素的殘留量。
二、適用范圍
定量檢測(cè)糧食、飼料等樣品中T2毒素的殘留。
三、糧食飼料版T2毒素ELISA檢測(cè)試劑盒特點(diǎn)及技術(shù)指標(biāo)
* 檢 測(cè) 時(shí) 間 ： 30 min
* 試劑盒靈敏度： 1ppb(µg/kg)
* 樣本處理方法簡(jiǎn)單，并與赭曲霉前處理方法部分統(tǒng)一化，節(jié)省了人力物力；
* 試劑盒提供工作濃度標(biāo)準(zhǔn)品，使用更方便；
* 試劑盒檢測(cè)樣本的靈敏度和準(zhǔn)確度：
樣本 | 檢測(cè)下限 | 回收率 |
糧食 | 100pb | 70%-120% |
飼料 | 100pb | 70%-120% |
試劑盒特異性：
藥物名稱 | 交叉反應(yīng)率（%） |
T2毒素 | * |
玉米赤霉烯醇 | ＜ 1% |
四、所需材料
儀器：微孔板酶標(biāo)儀450 nm/630 nm、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管（10 mL）、洗耳球、天平（感量0.01 g）、離心管（5 mL, 50 mL）、漏斗、分液漏斗、燒杯、定量分析濾紙
微量移液器：?jiǎn)蔚?1µL～10 µL、10 µL～100µL
多道 50µL～300µL
試劑：甲醇、去離子水。
五、 試劑盒組成
序號(hào) | 組成部分 | 96T裝量 |
1 | T2毒素酶標(biāo)板 | 12×8孔 |
2 | T2毒素標(biāo)準(zhǔn)品*5 | 0.5-1 mL |
3 | T2毒素酶標(biāo)物 | 7 mL |
4 | T2毒素抗體 | 7mL |
5 | 底物液A液 | 7 mL |
6 | 底物液B液 | 7 mL |
7 | 終 止 液 | 7 mL |
8 | 20×濃縮洗滌液 | 40 mL |
9 | 2×T2毒素樣品稀釋液 | 40mL |
*注：A、B、C、D、E共5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為：0ppb, 1ppb, 3ppb, 9ppb, 27ppb，A、B標(biāo)準(zhǔn)品各1mL，其余各0.5mL，直接使用。
六：溶液配制
配液1: 洗滌工作液
用去離子水將20 ×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進(jìn)行稀釋。配好的洗滌工作液在4 ℃環(huán)境可保存一 個(gè)月，用前一天取出回溫。
配液2: 1×T2毒素樣品稀釋液
用去離子水將2×T2毒素樣品稀釋液按1:1體積比進(jìn)行稀釋，用于樣本的稀釋，配好后在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月，用前一天取出回溫。
配液3: 樣品提取液
將甲醇與去離子水按V甲：V水=4:1 體積比配制成80%甲醇，即樣品提取液。
七、樣本前處理
樣本處理前須知：
① 處理完的樣品應(yīng)及時(shí)進(jìn)行下步檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。
② 樣本數(shù)目超過(guò)8個(gè)時(shí)推薦使用排槍加樣。
乳豬料、豬育肥料、花生粕、牛飼料、 全麥、全玉米（稀釋倍數(shù)：100倍）
① 稱取粉碎樣品1.0 g ± 0.05 g至離心管中，加入 10 mL 樣品提取液（配液3）， 震蕩提取1 min；
② 4000 r / min離心5 min；
③ 小心移取上清液100 μL 加到400μL 1 ×T2毒素樣品稀釋液中， 混勻，取50 μL用于分析。
八、 酶標(biāo)免疫測(cè)定程序
- 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，待其*回 升至室溫（20～25℃）后方可使用。注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
- 按標(biāo)準(zhǔn)品和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔。
- 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品、酶、抗體：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50µL到對(duì)應(yīng)的微孔中，加入T2毒素酶標(biāo)物50µL/孔，再加入T2毒素抗體50µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃環(huán)境中反應(yīng)20min。
- 洗板：小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，
加入洗滌工作液250µL/孔，每次靜置20s，甩去孔內(nèi)液體，重復(fù)洗滌3次，后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過(guò)的槍頭戳破）。
- 顯色：加入底物液A液50µL/孔，再加底物
液B液50µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)10min。
- 測(cè)定：加入終止液50µL/孔，用酶標(biāo)儀立即 測(cè)定450nm處的吸光度值（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm）檢測(cè)。
九、 結(jié)果判定
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以T2毒素標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ppb）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中T2毒素實(shí)際濃度。（詳見(jiàn)試劑盒專業(yè)分析軟件，以便進(jìn)行大量樣本的分析計(jì)算。）
十、 注意事項(xiàng)
① 洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
② 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
③ 不使用過(guò)了有效期的試劑盒，不交換使用不同批號(hào)的試劑。
④ 0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時(shí)間為10～15min即可。若顏色較淺，可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間到20min，反之則減短反應(yīng)時(shí)間。
⑥ 未提及樣本請(qǐng)致電本公司技術(shù)服務(wù)部。
十一、貯藏條件及保存期
貯藏條件： 2～8℃
保 質(zhì) 期： 12個(gè)月
十二、問(wèn)題與對(duì)
序號(hào) | 現(xiàn)象 | 可能原因 | 解決方法 |
1 | 板條不顯色或者無(wú)相應(yīng)數(shù)值 | 試劑使用順序混亂，或操作步驟出錯(cuò) | 嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)說(shuō)明重復(fù)實(shí)驗(yàn) |
使用了不同批次的試劑 | 確保試劑來(lái)自同一試劑盒 | ||
板條受潮嚴(yán)重 | 板條要封好，干燥劑失效要及時(shí)更換 | ||
2 |
低 吸 光 度
OD 值
| 試劑過(guò)期，或者不同的批次混用 | 查證過(guò)期試劑和批次 |
洗液配制錯(cuò)誤、洗滌浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng) | 按照說(shuō)明書要求洗滌，并正確配制洗液 | ||
孵育時(shí)間過(guò)短 | 按照說(shuō)明書要求，嚴(yán)格計(jì)算好時(shí)間 | ||
試劑污染 | 確保吸取不同液體更換新的槍頭和盛放器皿 | ||
試劑溫度過(guò)低 | 根據(jù)試劑體積大小回溫時(shí)間相應(yīng)延長(zhǎng)，確保試劑*回溫 | ||
使用錯(cuò)誤波長(zhǎng)讀數(shù)，或者酶 標(biāo)儀失靈 | 確保450nm波長(zhǎng)讀數(shù)，檢查酶標(biāo)儀是否故障 | ||
試劑盒處于的條件 | 使用完畢的部分請(qǐng)立即放回冰箱，勿置于過(guò)熱環(huán)境時(shí)間太長(zhǎng) | ||
3 | 過(guò)高的 背景值或吸光度（OD值） | 使用了質(zhì)量差的水配制試劑 | 使用雙蒸水或去離子水配制試劑 |
洗滌不當(dāng)或者洗板機(jī)洗板效果不好 | 增加1-2次洗滌，每孔至少加入250μL洗液 | ||
酶標(biāo)儀失靈，如OD值讀數(shù)很高而顏色很淺 | 使用校正微孔板檢查酶標(biāo)儀，檢查光源 | ||
實(shí)驗(yàn)室溫度過(guò)高，反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng) | 測(cè)定操作溫度是否合適，時(shí)間是否計(jì)算正確 | ||
試劑混淆，被污染或者配制不當(dāng) | 確保使用正確的試劑，準(zhǔn)確配制，避免污染 | ||
4
| 板內(nèi) 差異性 大 | 加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣品等的時(shí)間不* | 使用多道槍加樣，同種試劑加樣途中不能中斷 |
多道槍使用不當(dāng) | 校準(zhǔn)多道槍，檢查吸嘴是否套緊，確保吸液量* | ||
洗滌系統(tǒng)出現(xiàn)故障 | 檢查洗滌系統(tǒng)，保持良好運(yùn)行 | ||
5 | 板 間 差 異 性 大
| 板與板之間孵育時(shí)間相差太大 | 獨(dú)立計(jì)時(shí)，確保*的孵育時(shí)間 |
板與板之間不*的洗滌過(guò)程 | 確保相同的洗滌次數(shù)，保證洗滌系統(tǒng)正常運(yùn)作 | ||
使用移液槍不當(dāng) | 檢查移液槍，確保吸取相同液量 | ||
試劑和樣品處于不同溫度 | 確保盒內(nèi)試劑和樣品液等充分回溫，如果試劑體積較大則需要回溫較長(zhǎng)時(shí)間。不能用溫水浴回溫樣品 | ||
不同批次的試劑混用，或試劑盒過(guò)期 | 試劑不要混用，通常0標(biāo)準(zhǔn)品的OD值小于0.5顯示試劑質(zhì)量下降 | ||
6 | 一個(gè)或多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)點(diǎn)超出曲線范圍 | 標(biāo)準(zhǔn)品添加順序混亂，或者放置于錯(cuò)誤位置 | 按照說(shuō)明要求重復(fù)實(shí)驗(yàn)，保證標(biāo)準(zhǔn)品添加正確。 |
標(biāo)準(zhǔn)品被污染或與其他標(biāo)準(zhǔn)品混淆 | 改用新的標(biāo)準(zhǔn)品，按照由低濃度到高濃度的順序添加標(biāo)準(zhǔn)品 | ||
洗滌不*或者洗滌系統(tǒng)失靈 | 遵循一如既往的洗滌方式，檢查洗滌系統(tǒng) | ||
加入標(biāo)準(zhǔn)品和試劑的時(shí)間不* | 由低到高濃度依次添加標(biāo)準(zhǔn)品，使用多道槍移液 | ||
多道槍使用不當(dāng) | 校準(zhǔn)多道槍，檢查吸嘴是否套緊，確保吸液量* |