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公司新品：β-Gal染色試劑盒使用說(shuō)明說(shuō)
點(diǎn)擊次數(shù)：2826 發(fā)布時(shí)間：2021-10-8
β-Gal染色試劑盒 (組織專用)?
貨號(hào)：R0757
規(guī)格：100T
保存：-20℃，避光，12 個(gè)月。
簡(jiǎn)介：?β
β-Gal染色試劑盒(組織專用)?(β-Galactosidase?Staining?Kit)是一種基于衰老時(shí)SA-β-Gal?(senescence-associated?β-galactosidase)活性水平上調(diào)而對(duì)衰老細(xì)胞或組織進(jìn)行染色檢測(cè)的試劑盒。在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以觀測(cè)到細(xì)胞或組織的衰老情況。絕大多數(shù)正常細(xì)胞被認(rèn)為僅有有限的分裂能力，在不能分裂后就進(jìn)入衰老狀態(tài)。此時(shí)細(xì)胞仍然是存活的，但細(xì)胞的基因和蛋白的表達(dá)譜發(fā)生了很大改變。?
β-Gal染色試劑盒(組織專用)?以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會(huì)生成深藍(lán)色產(chǎn)物，光學(xué)顯微鏡下很容易觀察到變成藍(lán)色的表達(dá)β-半乳糖苷酶的細(xì)胞或組織。本試劑盒僅染色衰老細(xì)胞，對(duì)衰老前的細(xì)胞(presenescent?cells)、靜止期細(xì)胞(quiescent?cells)、永生細(xì)胞(immortal?cells)或腫瘤細(xì)胞等不會(huì)染色。對(duì)于組織切片或組織塊應(yīng)采用冰凍切片，可以檢測(cè)的樣品數(shù)量視樣品的大小而定，對(duì)于普通的切片按每片1ml可以檢測(cè)100個(gè)樣品
組成：
名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑(A):?β-Gal?Fixative | 100ml | 4℃ |
試劑(B):?X-Gal?Solution | 5ml | -20℃ |
試劑(C):?β-Gal Staining?A?Solution | 1ml | 4℃ |
試劑(D):?β-Gal Staining?B?Solution | 1ml | 4℃ |
試劑(E):?β-Gal Staining?C?Solution | 100ml | 4℃ |
??????????????????????????????????????????????????????????????????
自備材料：?
1、PBS或HBSS??
2、2、冷凍切片?
3、3、顯微鏡??
操作步驟(僅供參考)：?
1. 對(duì)于組織切片或非常小的組織塊，加入適當(dāng)體積的β-Gal Fixative，染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于10分鐘。對(duì)于小的組織塊，固定時(shí)間應(yīng)該適當(dāng)延長(zhǎng)。
2. 用PBS洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。對(duì)于組織塊，時(shí)間還要適當(dāng)延長(zhǎng)。
3. 吸除PBS，每孔加入1毫升染色工作液。染色工作液的配制參照下圖。
4. 37℃孵育20分鐘至2小時(shí)，或更長(zhǎng)時(shí)間，直至部分細(xì)胞的顏色變藍(lán)。如果孵育時(shí)間較長(zhǎng)，可以用parafilm或保鮮膜封住放置組織的容器，以防止蒸發(fā)。
5. 吸除染色工作液，用PBS洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。對(duì)于組織塊，時(shí)間還要相應(yīng)延長(zhǎng)。
6. 普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時(shí)觀察，可以去除染色工作液，加入2毫升PBS，4℃可以保存數(shù)天。
方法參考下表比例：
名稱 | 體積 |
β-Gal Staining?A?Solution | 10ul |
β-Gal Staining?B?Solution | 10ul |
β-Gal Staining?C?Solution | 930ul |
X-Gal?Solution | 50ul |
說(shuō)明：對(duì)于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的簡(jiǎn)單的判定方法是：聚丙烯容器可以高溫高壓滅菌；而聚苯乙烯容器不適合高溫高壓滅菌，一旦高溫高壓處理就會(huì)嚴(yán)重變形。?4、37℃孵育2h至過(guò)夜，直至樣品顯藍(lán)色。可以用parafilm或保鮮膜封住防止蒸發(fā)，最好把整個(gè)切片浸泡在染色工作液中，應(yīng)注意37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行。?5、普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時(shí)觀察，加上封片液封片后4℃可以保存較長(zhǎng)時(shí)間。?
注意事項(xiàng)：?
1、?β-Gal?Fixative有一定的腐蝕性和氣味，操作時(shí)請(qǐng)注意防護(hù)。?
2、?β-Gal?染色反應(yīng)依賴于特定的pH條件，不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行染色反 應(yīng)。用于細(xì)胞培養(yǎng)的二氧化碳培養(yǎng)箱中較高濃度的二氧化碳會(huì)影響染色工作液的pH值，而導(dǎo)致染色失敗。?
3、?配制染色工作液時(shí)需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯 (polystyrene)容器。但染色時(shí)可以在聚苯乙烯(polystyrene)容器中進(jìn)行，例如普通的6孔板就可以用作染色的容器。??
有效期：?12個(gè)月有效。? ?