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關于顯微圖像分析應用中的注意事項
閱讀：1217 發布時間：2015-7-23
顯微圖像分析應用中的注意事項：
隨著生命科學研究的突飛猛進和各門學科定量研究的快速發展，圖像分析系統在醫學研究中的應用越來越廣泛．并逐漸成為組織化學和免疫組織化學定量分析的主要手段。為了得到比較客觀的圖像分析結果，應該充分考慮諸多因素對圖像分析系統的影響，并盡可能使實驗組與對照組的處理條件保持一致，應用注意事項如下：
隨著生命科學研究的突飛猛進和各門學科定量研究的快速發展，圖像分析系統在醫學研究中的應用越來越廣泛．并逐漸成為組織化學和免疫組織化學定量分析的主要手段。為了得到比較客觀的圖像分析結果，應該充分考慮諸多因素對圖像分析系統的影響，并盡可能使實驗組與對照組的處理條件保持一致，應用注意事項如下：
《一》設計在先，測試在后
這是在進行圖像分析時zui容易忽視的問題。在實驗之前的設計中，要滿足有關測試所需的基本條件，如圖像的來源是否帶有偏差抽樣，放大倍數是否相等。這些圖像可能因為來源不符合圖像分析系統的基本原理和應用條件而存在明顯缺陷，勉強測試和分析很可能導致錯誤結果，得出錯誤結論。
《三》測試樣本的代表性
應用隨機抽樣的方法來保證測試樣本具有足夠的代表性。使用足夠的樣本數量，一定要注意到照片數或視野數并不能代替實際研究對象的例數進行統計學分析。
《三》實驗操作過程的一致性
用于定量分析的標本，從取材和固定開始的各項操作和每一步驟的處理應該相同。對照組與實驗組的組織塊大小與厚度應一致；切片厚度、固定方法也要一致；如用貼片法，實驗組與對照組的切片裱在同一載玻片上，如用漂染法，則在同一容器中進行處理；各種試劑的濃度、處理時間及顯色時間應盡可能一致。只有做到實驗操作的嚴格一致，對照組與實驗組之間的定量分析才有可比性。
《四》圖像分析系統輸入條件的一致性
在對圖像進行輸入時，應盡可能地保持各種條件一致。如利用光學顯微鏡、電子顯微鏡、數碼攝像機或數碼照相機作為輸入設備時，顯微鏡的光源電壓、光圈大小、聚光器位置、放大倍數、圖像的清晰度和攝像機或照相機的光圈、焦距等均應一致。輸入圖像過程中任何細小變化均可能導致定量結果的較大差別，特別是灰度值或光密度值等。圖像的顏色飽和度、反差和亮度的強弱也與操作者主觀意志密切相關，這就要求操作者不能帶有主觀意識操作，否則可人為地造成定量結果的誤差。
《五》圖像分析系統觀有參數的局限性
圖像分析系統中的一些常用參數，如面積、周長、長度及光密度等并非能解決所有實驗的需求，有時應根據組織結構特點，開發和引入適合于組織化學與免疫組織化學染色的新特征參數，以便全面準確地反映組織結構特點。如果多種參數聯合應用，有助于反映某一細胞或組織區別于其他細胞或組織的特征。
《六》三維定量信息的局限性
圖像分析系統獲得的信息為二維定量信息，不能真實地反映組織結構的三維定量特征。例如，當比較各組樣本的參照空間(包含感興趣結構的區域)體積不同時，很難根據圖像分析系統所得到的密度信息得出正確結論，即存在所謂的參照空間的“陷阱”問題。現代體視學方法能夠獲得組織結構的三維定量特征，也能夠獲得感興趣結構的定量信息。因此，把現代體視學方法的原理正確應用于圖像分析系統的定量研究中，有利于獲得更為準確的定量信息。