切片染料的選擇與染色技術,與欲觀察的組織和顯微鏡種類均有關!
閱讀:2132 發布時間:2012-6-6
脫水染色:
染色(staining)是將切片浸泡于染色液中,讓組織與染料結合併產生著色(注2),如此可增強組織在顯微鏡下的對比效果,方便觀察與拍攝。
染料依化學性質不同可分為堿性染料(basic dye)與酸性染料(acid dye);依來源可分為天然染料(natural dye)或綜合染料(synthetic dye)。堿性染料帶正電荷,可染上組織細胞內帶負電荷(酸性)的部分,如染色體、核仁、木質部等;酸性染料則帶負電荷,可與細胞內帶正電荷之處結合,如細胞質、纖維素等。
染料的選擇與染色技術,與欲觀察之組織、顯微鏡之種類及光源均有關,如木質化的細胞壁對番紅(Safranin-O)的親合力較強,韌皮部對速綠(fast green)的親和力較強,藉此雙重染色可得到紅綠不同之明顯對比;若使用偏光顯微鏡(polarizing microscope)則其本身之偏光透鏡即可產生不同色彩對比之偏光效果,若采用螢光顯微鏡(fluorescent microscope)則需使用螢光劑進行染色。
一般觀察木材切片時可單用番紅或以番紅與速綠進行搭配染色即可得到良好之觀察效果。因此在此介紹番紅-速綠雙重染色法。
組織與染料的結合方式可分為離子型(ionic)、氫鍵型(hydrogen bonding)、共價鍵型(covalent bonding)等。
離子型與氫鍵型的結合力較弱,所以染后組織容易脫色,而糗顏色隨pH值與濃度而異。
共價型染料本身通常可區分為發色團(chromophore)助色團(auxochrome)兩部分,反應端的化學分子通常能與羥基、胺基產生反應并結合。
(注3):fast-green在堿性下呈藍色,可加濃鹽酸1至數滴予以調節呈綠色。
(注4):二甲苯可和脫水酒精以及封片膠互溶,可作為此兩者之媒介物;如果脫水不*時,加入二甲苯澤溶液會呈現混濁白色,
因此也可當作脫水*之指示劑。
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