改良精子冷凍保護劑公司正在銷售的產品：豚鼠集蛋白亞家族成員11(COLEC11)試劑盒 Anti-ITGA1 Antibody甲狀腺受體相關蛋白220抗體
豚鼠α1連接素(CTNNα1)試劑盒Anti-ITGA2B Antibody磷酸化甲狀腺受體相關蛋白220抗體
豚鼠促生長(GH)試劑盒Anti-ITGA1 Antibody抑癌基因5抗體
豚鼠α-骨膠原交聯(α-CTx)試劑盒Anti-ITG

公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點，咨詢并訂購！

產品分類：細胞其他

儲存條件： -20℃,3個月

用途：又名Tyrod-葡萄糖冷凍保護劑，用于精子的冷凍保護,減少因冷凍造成精子的死亡。精子冷凍保護劑的一種，不含卵黃。主要用于少精子癥標本和手術取精的冷凍方案。

注意事項：無菌溶液。含有葡萄糖、甘油、人血清白蛋白、Tyrode溶液，無卵黃等。

 

 

配制與標定的實驗原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑，基準試劑的預處理：稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標線，搖勻。

 

 

實驗方法與判定：

1.對照品溶液的穩定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。

4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內穩定可靠。

酰次烏頭原堿（標準品） Myokinase癌基因ERG3抗體包裝1g

?；昝仔?/span>O Phosphodiesterase II from Bovine Spleen豬源產腸性大腸桿菌K88-K99抗體包裝25g

酰芍藥苷(標準品) SuccinimideFAS凋亡抑制分子3抗體包裝5g

酰烏頭原堿（標準品） 5-Bromouridine纖維束1抗體包裝25g

酰新烏頭原堿（標準品） ADA buffer, disodium salt叉頭蛋白P3抗體包裝5g

酰氧化芍藥苷 Albumin, from bovine Protease free免疫球蛋白G Fc段受體I包裝1g

比靈,右旋荷包牡丹堿（標準品） Aluminum stearate叉頭蛋白M1抗體包裝5g

蓽茇（標準品） Bismuth(III) nitrate pentahydrate磷化雷帕霉靶蛋白抗體包裝500ml

蓽澄茄（標準品） Calcium phosphate, dibasic, dihydrate磷化粘著斑激抗體包裝100ml

蓖麻子（標準品） Cerium(III) carbonate, hydrate絲聚合蛋白/中間絲蛋白抗體包裝25ml

蝙蝠葛堿(標準品) Chymotrypsinogen A肺鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體（C端）包裝10g

蝙蝠葛諾林堿(標準品) Cibacron blue 3G-A13抗體(纖維蛋白穩定因子)包裝50g

蝙蝠葛蘇林堿(標準品) DEAE Dextran濾泡樹突分泌蛋白抗體包裝25g

扁柏雙黃(標準品) Fluridone纖維母生長因子13抗體包裝5g

扁桃苷/苦杏仁苷(標準品) Histamine骨骼肌肌球蛋白輕鏈2抗體包裝100g

淺灰鏈霉菌Streptomyces│griseolus 質量規格：>97%,BR瘦試劑盒染料木;Genistein

白乳菇Lactarius│piperatus (L.) Pers. 質量規格：HPLC>99%,標準品受體型酪蛋白磷樣N試劑盒;

鴨瘟病毒Alphaherpesvirinae│Duck plague virus 質量規格：≥99.0%受體TNFRSF結合絲蘇激2試劑盒 IIb;Escin IIb
改良精子冷凍保護劑TGF- Beta3/FITC  熒光標記轉移生長因子–β3IgG

TGF- BetaR1/ALK /FITC  熒光標記轉移生長因子–β受體1IgG

TGF- BetaR 2/FITC  熒光標記轉移生長因子–β受體2IgG

TGF- BetaR 3/FITC  熒光標記轉移生長因子–β受體3IgG

TGM3/FITC  熒光標記轉谷氨酰3IgG

Thioredoxin 1/FITC  熒光標記硫氧還蛋白IgG

Thymosin Alpha-1/FITC  熒光標記 α-1IgG

Tie1/FITC  熒光標記血管生成-1受體IgG

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2培養過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩定轉染細胞的篩選

1）  轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。

5）   之后更換正常培養基培養即可。