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詳細介紹
商品屬性：
產品名稱 | |
檢測方法 | 紫外分光光度法 |
產品規格 | 50管/48樣 |
產品貨號 | AS6321147 |
商品介紹：
測定意義： CA是線粒體三羧酸循環的第一個中間產物，由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循環強度的主要指標之一。 配合測定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量，其中（1）丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進行程度，（2）綜合分析丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰CoA含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰CoA情況，（3）乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量變化可以反映三羧酸循環進行狀況。 測定原理： CA在檸檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性條件下，α-酮酸進一步與苯肼反應，生成相應的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在330nm處有吸收峰，該波長下吸光度的變化程度可反映出CA的含量。 自備儀器和用品： 可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液槍、1mL石英比色皿、研缽和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制：
酸性提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；堿性提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；試劑一：液體10 mL×1瓶，4℃保存；試劑二：液體3 mL×1瓶，4℃保存；試劑三：粉劑×1瓶，-20 ℃保存，用時加入3mL蒸餾水，混勻，用不完的試劑4℃保存一周；試劑四：粉劑×1瓶，4 ℃保存，用時加入3mL蒸餾水，混勻，用不完的試劑4℃保存一周；試劑五：液體3.6mL×1瓶，4 ℃保存；試劑六：液體30mL×1瓶，4 ℃保存；試劑七：液體50mL×1瓶，4 ℃保存。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提取：
1、血清（漿）中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取：按照血清（漿）體積（ml）：酸性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建 議取約0.1ml血清（漿），加入1ml酸性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）； 冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl堿性提取液使之中 和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 NADH的提取：按照血清（漿）體積（ml）：堿性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建 議取約0.1ml血清（漿），加入1ml堿性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）； 冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中 和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 | 2、組織中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：按照組織質量（g）：酸性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建議取約0.1g 組織，加入1ml酸性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴 中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 NADH的提取：按照組織質量（g）：堿性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建議取約0.1g 組織，加入1ml堿性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴 中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中和， 混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 | 3、細胞或細菌中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：先收集細胞或細菌到離心管內，棄上清，按照細菌或細胞數量（104個）：酸性 提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml酸性提取液）， 超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次），95℃水浴5min （蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加 入500μl堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 NADH的提取：先收集細胞或細菌到離心管內，棄上清，按照細菌或細胞數量（104個）：堿 性提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml堿性提取液）， 超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次），95℃水浴5min （蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加 入500μl酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 |
ADH測定操作：
1. 分光光度計預熱30 min，調節波長到340 nm，蒸餾水調零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化，分別記錄15s和75s時吸光值，分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 測定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化，分別記錄15s和75s時吸光值，分別記為A3和A4。△A測定管=A3-A4。
注意：空白管只需測定一次。
注意事項：
①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。
百合（標準品）英文名： Lithium citrate, tetrahydrate紅膜蛋白4.2抗體包裝100g
百兩金A（標準品）英文名： MU-Gal轉錄因子ELYS蛋白抗體包裝25g
百秋李(標準品)英文名： MU-GLU內皮粘蛋白EMCN抗體包裝500g
百蕊草（標準品）英文名： MUP, disodium salt, trihydrate調節鳥核苷交換因子1抗體包裝25g
百蕊草I/山柰-3-葡萄糖鼠李糖苷/阿福豆苷(標準...英文名： POPOP磷化轉錄因子E2F1抗體包裝5g
柏子仁（標準品）英文名： PPO上皮特異性轉錄因子1抗體包裝100g
敗醬草（標準品）英文名： Sodium glycolate內皮2抗體包裝25g
斑蝥（標準品）英文名： Span* 60內皮受體蛋白酪激B3抗體包裝1g
板藍根（標準品）英文名： Titanium (IV) oxide軟骨外胚層發育不良相關蛋白抗體包裝250mg
半邊蓮（標準品）英文名： Triton X-405髓鞘蛋白P0樣蛋白2抗體包裝5g
半甘草異黃B英文名： Urinary trypsin inhibitor fragment雌激受體α抗體包裝25MG
半夏（標準品）英文名： Zinc oxide內質網核信號轉導蛋白2抗體包裝1g
半枝蓮（標準品）英文名： 4(5)-Methylimidazole鋅指蛋白521抗體包裝250mg
寶藿苷I,羊藿次苷II(標準品）英文名： Aluminum hydroxide大腸桿菌埃希桿菌O6抗體（腸致病性大腸桿菌O6）包裝5g
寶藿苷II；大花羊藿苷A；意瑞苷A(標準品)英文名： Ammonium phosphate, tribasic , trihydrate植物延展-β包裝100mg
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質量規格：總含量>95% ,進分痘帶狀皰疹病IgG試劑盒瑞香;7,8-Dihydroxycou
熒光假單胞菌Pseudomonas│fluorescens 質量規格：>98%;NK1受體拮抗劑雙氫睪試劑盒肉桂;Cinnamyl alcohol
圍小從殼Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk 質量規格：>98%,BR衰變加速因子試劑盒肉桂;Cinnamaldehyde
線粒體檸檬酸(MCA）含量測試盒50管/48樣麥芽糖假絲酵母 4-氮雜可溶性CD40分子Elisa
新月彎孢 Boc-5-氨基戊酸γ氨基丁酸受體Elisa
黃孢平革 2-乙酰基噻唑粘蛋白5B抗體Elisa
腐皮殼 磷酸一水合物磷酸二酯3AElisa
弗雷德里克斯堡假單胞 耐曬猩紅RC鉤端螺旋體Elisa
不吸水鏈霉 九氟戊酸蘭尼堿受體3Elisa
寄生孢 D-谷二甲酯鹽酸鹽6磷酸葡萄糖Elisa
巨大曲霉 2-溴-5-甲酯5磷酸核酮糖Elisa
禾粘座孢霉（或禾漆斑） N,N-二異酰甲殼質蛋白40Elisa
鹽水鹽土生古 (R)-2-羥基-3-苯基酸甲酯氨基酸Elisa
豬丹絲 8-溴-1-辛烯嗜TI型病Elisa
栗疫 4-羥基苯酸頻哪酯阿伯糖苷Elisa
波恩佩島蒼黃色桿 D-2,4-二氨基丁酸ZDNA結合蛋白1Elisa
木霉 5--2-甲RAS癌基因家族Elisa
膠孢 異壬酸天門冬氨基轉移Elisa
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