PolyLea非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑公司正在銷售的產(chǎn)品：兔基質(zhì)金屬蛋白酶-13(MMP-13)試劑盒Anti-IBSP AntibodyUNC80蛋白抗體
兔低密度脂蛋白受體(LDLR)試劑盒Anti-HYI Antibody四分子交聯(lián)體4抗體（四旋蛋白）
兔端錨聚合酶2 (TNKS2)試劑盒Anti-IBSP Antibody轉(zhuǎn)錄因子Tbx18抗體
兔甘露糖受體C2 (MRC2)試劑盒 Anti-IC

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購！

產(chǎn)品分類：細(xì)胞其他

儲(chǔ)存條件：4℃,12個(gè)月

用途：適合于將核酸(DNA和RNA)轉(zhuǎn)染入真核細(xì)胞。

注意事項(xiàng)：無菌溶液,采用配方的陽離子聚合物為主要成分,其高度的分支結(jié)構(gòu)確保了高正離子電荷密度,使得與帶有負(fù)電荷的外源基因結(jié)合更有效,容易被細(xì)胞吸收,排斥少,因此能顯著提高外源基因的轉(zhuǎn)染效率。根據(jù)長(zhǎng)時(shí)間的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,PolyLea非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染每微克DNA用量少,效率高,成功率高,適合多種類型的細(xì)胞系,細(xì)胞存活率高,可以廣泛用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

鹽格司瓊（標(biāo)準(zhǔn)品） Solamargine質(zhì)分裂付出蛋白1抗體包裝25g

鹽關(guān)附（標(biāo)準(zhǔn)品） Solasonine腦表皮生長(zhǎng)因子跨膜蛋白DNER抗體包裝500g

鹽環(huán)沙星（標(biāo)準(zhǔn)品） Angoroside CDUX3蛋白抗體包裝1g

鹽環(huán)侖特羅（標(biāo)準(zhǔn)品） Toremifene 死亡相關(guān)蛋白1抗體包裝250mg

鹽黃哌酯（標(biāo)準(zhǔn)品） Toremifene 軸絲動(dòng)力蛋白重鏈9抗體包裝5MG

鹽噻/泊雜質(zhì)J(標(biāo)準(zhǔn)品) Neratinib(HKI-272)磷化動(dòng)力相關(guān)蛋白1抗體包裝100ml

鹽芬酯(標(biāo)準(zhǔn)品) Methyl ProtodioscinDNA連接4抗體包裝1g

鹽氧那明（標(biāo)準(zhǔn)品） Gracillin二肽基肽6抗體包裝5g

鹽金剛烷（標(biāo)準(zhǔn)品） Yohimbine HCl二氫葉還原抗體包裝1g

鹽金剛乙（標(biāo)準(zhǔn)品） Yohimbine HCl有絲分裂控制樣蛋白DIS3L抗體包裝5g

鹽金霉(標(biāo)準(zhǔn)品) Phentolamine mesilate有絲分裂控制蛋白樣DIS3L2抗體包裝1g

鹽肼屈（標(biāo)準(zhǔn)品） Phentolamine mesilateDOM3Z蛋白抗體包裝5g

鹽替洛爾（標(biāo)準(zhǔn)品） Vemurafenib,PLX 4032蓬亂蛋白2抗體包裝100g

鹽克林霉(標(biāo)準(zhǔn)品) Praeruptorin E磷化蓬亂蛋白2抗體包裝25g

鹽喹那普（標(biāo)準(zhǔn)品） Praeruptorin A轉(zhuǎn)錄下調(diào)蛋白1抗體包裝500g

紅色糖多孢菌Saccharopolyspora│erythraea 質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測(cè)定透明質(zhì)結(jié)合蛋白2試劑盒蒜;(S)-3-(Allylsulp

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：含量≥900μg/mg，純度大于99%，USP32透明質(zhì)蛋白聚糖連結(jié)蛋白1試劑盒桑色;Morin

白蟻梭菌Clostridium│termitidis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品透明質(zhì)試劑盒沙苑子苷;complanatuside
PolyLea非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑RAP1A/FITC  熒光標(biāo)記抗Rap1IgG

RAR- Alpha /FITC  熒光標(biāo)記維受體-α IgG

RAR- Beta /FITC  熒光標(biāo)記維受體-βIgG

Phospho-Raptor (Ser792) /FITC  熒光標(biāo)記化mTOR相關(guān)調(diào)控蛋白IgG

RASSF1A/FITC  熒光標(biāo)記Ras相關(guān)區(qū)域家族1AIgG

RASGRF1/FITC  熒光標(biāo)記Ras特異性鳥核釋放因子1IgG

Phospho-RasGRF1 (Ser916)/FITC  熒光標(biāo)記化Ras特異性鳥核釋放因子1IgG

Rb/P5 RB/FITC   熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠成視網(wǎng)膜瘤抑癌蛋白IgG

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。