詳細介紹
產品分類:核酸雜交
儲存條件:4℃,避光,6個月
用途:用于RNA的含甲酰胺的雜交緩沖液,溶解RNA,并保護RNA
注意事項:由PIPES、EDTA、氯化鈉、去離子甲酰胺等組成。
公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
RNA雜交緩沖液 | 100ml | FS-R7407 |
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預處理:稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內穩定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現,至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上,37℃,CO2培養過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據細胞類型,設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(通常是7-10天)內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩定轉染細胞的篩選
1) 轉染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板,繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。
5) 之后更換正常培養基培養即可。
假單胞菌NK受體2C抗體Human LAPTM4B(Lysosomal-associated transmembrane protein 4B) ELISA Kit人抗卵巢抗體(AOAb)
新月彎孢霉性受體NK-p46抗體Human PTGS1(Prostaglandin G/H synthase 1) ELISA Kit人抗磷脂酰絲抗體(APSA)
橡膠樹假絲酵母性受體NK-p30抗體Human COL28A1(Collagen alpha-1(XXVIII) chain) ELISA Kit人抗磷脂抗體(Apl/APA)
水生黃桿菌磷化谷受體2A抗體Human FBLN1(Fibulin-1) ELISA Kit人抗磷壁抗體(TA)
日本根霉NK受體2D抗體Human FLT4(Vascular endothelial growth factor receptor 3) ELISA Kit人抗淋巴球蛋白(ALG)
嗜熱鏈球菌核呼吸因子-1抗體Human DICER1(Endoribonuclease Dicer) ELISA Kit人抗淋巴抗體(ALA/LCA)
多主葡萄殼菌神經肽Y受體2抗體Human KIF5A(Kinesin heavy chain isoform 5A) ELISA Kit人抗鏈球菌溶血O/抗O(ASO)
海泥黃桿菌神經絲蛋白抗體Human GAD2(Glutamate decarboxylase 2) ELISA Kit人抗尿激V2受體/精加壓受體2(AVPR2)
粗皮側耳(平菇)軸索過度生長抑制因子A+B抗體 Nogo-B/AHuman FGF6(Fibroblast growth factor 6) ELISA Kit人抗尿激/血管加壓/精加壓(ADH/VP/AVP)
紫芝神經元3抗體Human SERPINB4(Serpin B4) ELISA Kit人抗類固生成抗體(SCA)
孢小殼銀漢霉NFkB誘導激抗體Human UCN3(Urocortin-3) ELISA Kit人抗類風濕關節炎核抗原抗體(RANA)
Aeromicrobium marinum核因子p50/k基因結合核因子抗體Human MYH1(Myosin-1) ELISA Kit人抗類風濕關節炎核抗原(RANA)
硬結節桿菌神經激肽A受體/K物質受體抗體Human UBB(Polyubiquitin-B) ELISA Kit人抗可提取核抗原抗體(ENA-Ab)
白環柄菇神經激肽B抗體Human FGFR1(Fibroblast growth factor receptor 1) ELISA Kit人抗可溶性肝抗原抗體(SLA)
產黃青霉神經粘蛋白抗體Human BCAM(Basal cell adhesion molecule) ELISA Kit人抗菌肽(CAMP)
產氣莢膜梭菌 C型神經束蛋白抗體Human GLUL(Glutamine synthetase) ELISA Kit人抗菌肽(Attacin)
綠色木霉Trichoderma│viride 質量規格:>500U/MG,BR硫基葡萄糖
葡萄球菌Staphylococcus│sp. 質量規格:>98%,BR硫辛
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質量規格:0.97硫軟骨
RNA雜交緩沖液MPO(Mouse myeloperoxidase) ELISA Kit 小鼠髓過氧化物mei規格: 48T
Gzms-B(Mouse granzymes B) ELISA Kit 小鼠顆粒meiB規格: 48T
VEGFR-1/Flt1(Mouse Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 1) ELISA Kit 小鼠血管內皮細胞生長因子受體1規格: 48T
Gzms-A(Mouse granzymes A) ELISA Kit 小鼠顆粒meiA規格: 48T
Lptn/LTN/XCL1(Mouse lymphotactin) ELISA Kit 小鼠淋巴細胞趨化因子規格: 48T