Laemmli加樣緩沖液公司正在銷售的產品：Anti-TBX3 Antibody大鼠
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公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點，咨詢并訂購！

產品分類：蛋白電泳

儲存條件：4℃,12個月

用途：變性不連續PAGE，蛋白加樣緩沖液

注意事項：主要SDS、氧化劑、溴酚藍等組成。

 

 

配制與標定的實驗原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑，基準試劑的預處理：稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標線，搖勻。

 

 

實驗方法與判定：

1.對照品溶液的穩定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。

4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內穩定可靠。

金乳牛肝菌豬繁殖與呼吸綜合征/豬藍耳病病抗體Anti-BAG3 Antibodyγ肽(Pγ)

澳型核果褐腐病菌凋亡相關蛋白10抗體Anti-BAG1 Antibodyγ谷酰轉移(GGT)

澳型核果褐腐病菌鈣調蛋白依賴性蛋白激磷抗體Anti-BAG1 Antibodyγ-谷酰環化轉移(GGCT)

門多薩假單胞菌絲/蘇蛋白激PIM3抗體Anti-BAG5 Antibodyγ谷酰半胱合成(γ-ECS)

蠟樣芽孢桿菌組蛋白精甲基轉移5抗體Anti-BAG5 Antibodyγ谷-半胱合成(γ-GCS)

熱帶假絲酵母原鈣粘附蛋白11X抗體Anti-BAG3 Antibodyγ干擾誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)

粉紅聚端孢霉原鈣粘附蛋白11Y抗體Anti-BAK(BAK1) Antibodyγ干擾誘導單核因子(MIGF/CXCL9)

暗褐色毛霉原鈣粘附蛋白12/血管內皮鈣粘蛋白2抗體Anti-BAG6 Antibodyγ干擾受體(IFN-γR)

枯草芽孢桿菌原鈣粘附蛋白17抗體Anti-BAP1 Antibodyγ干擾(IFN-γ)

三葉草根瘤菌原鈣粘附蛋白1抗體Anti-BAX Antibodyγ干擾(IFNγ)

杰丁畢赤酵母原鈣粘附蛋白α1抗體Anti-BAK1 Antibodyγ分泌激活蛋白(PION)

深紅原鈣粘附蛋白α3抗體Anti-BAMBI Antibodyγ基丁(GABA)

金龜子綠僵菌原鈣粘附蛋白α4抗體Anti-BAX Antibodyβ-轉導重復序列包含蛋白(BTRC)

短乳桿菌原鈣粘附蛋白α5抗體Anti-BAX Antibodyβ抑制蛋白2(ARRB2)

發酵假絲酵母原鈣粘附蛋白α9抗體Anti-BAX Antibodyβ血小板球蛋白/β血栓環蛋白(β-TG)

側毛殼原鈣粘附蛋白α7抗體Anti-BAX Antibodyβ血小板球蛋白(β-TG)

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質量規格：HPLC>98%,標準品,還原型

巴斯德畢赤酵母Pichia│pastoris 質量規格：純度大于98%,BR

干酪乳桿菌假植物亞種Lactobacillus│casei subsp .pseudoplantarum 質量規格：>99%,BR
Laemmli加樣緩沖液Plant Vitamin D2,VD2 ELISA Kit   植物維生suD2規格： 48T

Plant Vitamin D3,VD3 ELISA kit   植物維生suD3規格： 48T

Plant Vitamin D,VD ELISA Kit   植物維生suD規格： 48T

Plant Vitamin B6,VB6 ELISA Kit   植物維生suB6規格： 48T

Plant 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 ELISA Kit   植物25羥基維生suD3規格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2培養過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩定轉染細胞的篩選

1）  轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。

5）   之后更換正常培養基培養即可。