Real-time PCR Mixture公司正在銷售的產品：Anti-SEMA4D Antibody人抗BP180抗體
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公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點，咨詢并訂購！

產品分類：PCR相關

儲存條件：—20℃,12個月

用途：專用于染料法（SYBR GreenⅠ）實時熒光定量PCR的預混體系，濃度為2×，包含GoldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I熒光染料、Mg 2+ 和校正染料ROX，操作簡單方便。主要用于基因組DNA靶序列和RNA反轉錄后cDNA靶序列的檢測。

注意事項：含有的熒光染料SYBR Green I可以與所有的雙鏈DNA結合，使該產品可用于不同靶序列的檢測而不需合成特異性標記探針；

含有的GoldStar?

 

 

配制與標定的實驗原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑，基準試劑的預處理：稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標線，搖勻。

 

 

實驗方法與判定：

1.對照品溶液的穩定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。

4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內穩定可靠。

植物乳桿菌植物亞種磷化中心粒蛋白Nudel抗體Human TLR2(Toll-like receptor 2) ELISA Kit基質金屬蛋白5(MMP-5)

吸水鏈霉菌磷化中心粒蛋白Nudel抗體Human TLR3(Toll-like receptor 3) ELISA Kit基質金屬蛋白4(MMP-4)

pMV306hsp+LuxG13（addgene26161）線粒體復合物NDUFS4蛋白抗體Human TNFβ(Tumor Necrosis Factor Beta) ELISA Kit基質金屬蛋白3/基質裂解1(MMP3/STR1)

豌豆根瘤菌NADH脫氫α家族8抗體Human VEGFR2/KDR(Vascular endothelial growth factor receptor 2) ELISA Kit基質金屬蛋白3(MMP-3)

枯草芽孢桿菌NADH脫氫黃蛋白1抗體Human TNFRSF11A/RANK(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 11A) ELISA Kit基質金屬蛋白25(MMP25)

立枯絲核菌NADH脫氫黃蛋白2抗體Human TNFRSF14/HVEM(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14) ELISA Kit基質金屬蛋白2/明膠A(MMP-2/Gelatinase A)

多主葡萄殼菌NADH氧化還原輔1抗體Human TNFRSF9/4-1BB(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9) ELISA Kit基質金屬蛋白2(MMP-2)

食鹿角菜假交替單胞菌膜內在蛋白NOD26抗體Human TNFSF13/APRIL(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13) ELISA Kit基質金屬蛋白1原(Pro-MMP-1)

番茄枯萎病菌磷化谷受體2B抗體Human TNFRSF4/OX40(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4) ELISA Kit基質金屬蛋白14(MMP-14)

膠凍樣類芽孢桿菌磷化谷受體2A+2B抗體Human TNFRSF5/CD40(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5) ELISA Kit基質金屬蛋白13(MMP-13)

頂孢霉高度相似的周期蛋白激NEK6抗體Human TNFSF11/RANKL(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 11) ELISA Kit基質金屬蛋白12(MMP-12)

枯草芽孢桿菌A型流感病-NS1抗體（神經1）Human TNFSF4/OX40L(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 4) ELISA Kit基質金屬蛋白11(MMP11)

高山被孢霉去甲腎上腺轉運蛋白/神經遞質去甲腎上腺轉運體抗體Human TNFSF14/LIGHT(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 14) ELISA Kit基質金屬蛋白10(MMP-10)

構巢曲霉磷化一氧化氮合成3（內皮型）抗體Human TNFSF18(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 18) ELISA Kit基質金屬蛋白1(MMP-1)

草生毛霉新的飽食分子蛋白抗體Human TGFBR2(TGF-beta receptor type-2) ELISA Kit基質γ羧基谷蛋白(MGP)

小孢根霉須狀變種脊髓灰質炎病受體相關蛋白4抗體Human TGFβ1(Transforming Growth Factor Beta 1) ELISA Kit基膜聚糖/內腔蛋白(LUM)

炭疽芽胞桿菌Bacillus│anthracis 質量規格：HPLC>99%,標準品丹參IIA

蛇孢霉屬Polyscytalum│sp. 質量規格：>98%,BR丹B

灰藤黃鏈霉菌Streptomyces│griseoluteus 質量規格：>98%,BR丹A
Real-time PCR MixtureSAA(Mouse Serum amyloid A)ELISA Kit  小鼠血清淀粉樣蛋白A規格： 48T

ACA(Mouse centrol and centrosome antibody)ELISA Kit  小鼠抗中性粒/中心體規格： 48T

Hpt/HP(Mouse Haptoglobin)ELISA Kit  小鼠結合珠蛋白/觸珠蛋白規格： 48T

16- Alpha OHE-1(Mouse 16- AlphaHydroxyestrogen 1)ELISA Kit  Hpt/HP小鼠16α羥基雌tong1規格： 48T

Alpha1-AGP(Mouse Alpha1-Acid glycoprotein)ELISA Kit  小鼠α1suan性糖蛋白規格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2培養過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩定轉染細胞的篩選

1）  轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。

5）   之后更換正常培養基培養即可。