產(chǎn)品分類:DNA溶液
儲(chǔ)存條件:4℃,6個(gè)月
用途:
注意事項(xiàng):無(wú)菌溶液,過(guò)濾除菌。主要由氯化鎂、氯化鈣、蔗糖、HEPES組成。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn),咨詢并訂購(gòu)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
XB緩沖液 | 100ml | FS-R7339 |
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來(lái)水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性
2.對(duì)照品溶液的配制:精密量取腦對(duì)照品適量,加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測(cè)器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對(duì)照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液,三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái),保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%,驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來(lái)確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過(guò)建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來(lái)實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過(guò)夜;注:對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4) 接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
云芝驅(qū)動(dòng)蛋白家族蛋白3抗體Human PRCC ELISA Kit血小板相關(guān)補(bǔ)體3(PAC3)
中生根瘤菌驅(qū)動(dòng)蛋白2抗體Human PRKAR1A(Protein kinase cAMP-dependent type I regulatory subunit alpha) ELISA Kit血小板生長(zhǎng)因子(PGF)
枯草芽孢桿菌KIAA1522蛋白抗體Human PRDM10 ELISA Kit血小板生成(TPO)
漢遜德巴酵母離子通道四聚體結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體Human PRKAR1B ELISA Kit血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-Ⅳ)
芽孢桿菌高分子量激肽原重鏈抗體Human PRDM15(PR domain zinc finger protein 15) ELISA Kit血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)
毛栓孔菌通道四聚體結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體Human PRDM4 ELISA Kit血小板堿性蛋白(PBP/CXCL7)
貝倫格葡萄座腔菌梨生專化型Kelch樣蛋白26抗體Human PRKD2 ELISA Kit血小板活化因子(PAF)
滑菇賴,天冬,谷,亮相關(guān)序列抗體Human PREB ELISA Kit血小板反應(yīng)蛋白/凝血敏感蛋白1(TSP-1)
產(chǎn)黃青霉Kelch樣蛋白10抗體Human PRKCDBP ELISA Kit血纖肽/纖維蛋白肽B(FPB)
蠟樣芽孢桿菌Kelch樣蛋白11抗體Human PRKAR2B ELISA Kit血纖肽/纖維蛋白肽A(FPA)
彎孢菌Kelch樣蛋白3抗體Human LALBA(Alpha-lactalbumin) ELISA Kit血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)
云芝Kelch樣蛋白14抗體Human PRELID1 ELISA Kit血纖蛋白原γ鏈(FGG)
短桿菌Kelch樣蛋白31抗體Human DHH(Desert hedgehog protein) ELISA Kit血纖蛋白原(Fbg)
CystofilobasidiumKelch樣蛋白32抗體Human PPP4R2 ELISA Kit血纖蛋白(Fibrin)
致病擬桿菌電壓閥門(mén)通道混合器相關(guān)亞家族成員5抗體Human PRKG2 ELISA Kit血吸蟲(chóng)(schistosoma)
糞腸球菌TGF-β誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1抗體Human PPPDE1 ELISA Kit血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)
硫紅球菌Thiorhodococcus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)肉桂
大西洋假交替單胞菌Pseudoalteromonas│atlantica 質(zhì)量規(guī)格:>96.0%(GC)肉桂
: 43076資源名稱: 偶發(fā)分枝桿菌偶發(fā)亞種 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(T)肉桂
XB緩沖液BDNF ELISA Kit 大鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子規(guī)格: 48T
ACV-A ELISA Kit 大鼠活化suA規(guī)格: 48T
ANG- II ELISA Kit 大鼠血管緊張suⅡ規(guī)格: 48T
ACE ELISA Kit 大鼠血管緊張su轉(zhuǎn)化mei規(guī)格: 48T
PF/PFP(Rat Perforin/Pore-forming protein) ELISA Kit 大鼠穿孔su規(guī)格: 48T