苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)試劑公司正在銷售的產(chǎn)品：雞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2/KDR)試劑盒Anti-CNTD2 Antibody肝炎病X蛋白(HBxAg)C端抗原
雞血管生成素樣蛋白3(ANGPTL3)試劑盒 Anti-CNTN6 Antibody人α亞基人絨毛膜促性腺多肽抗原
雞球蛋白G Fc片段(Fcγ)試劑盒 Anti-COL11A1 Antibody膀胱腫瘤抗原
雞胸腺依賴性抗原(

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產(chǎn)品分類：微生物染色

儲(chǔ)存條件：室溫,12個(gè)月

用途：用于細(xì)菌的過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)或觸媒試驗(yàn)

注意事項(xiàng)：由過(guò)氧化氫等組成，有一定腐蝕性

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

猴頭兒茶O甲基移位抗體Human UCMA(Unique cartilage matrix-associated protein) ELISA Kit人纖維連接蛋白(cFn)免疫試劑盒

馬克斯克魯維酵母補(bǔ)體C1qTNF9鏈多肽抗體Human Cytochrome b-245 Beta Polypeptide ELISA Kit人外基質(zhì)磷糖蛋白(MEPE)免疫試劑盒

出芽短梗霉平滑肌鈣調(diào)蛋白CNN2抗體Human NADPH oxidase 5 ELISA Kit人色P450c21B/21-羥化(CYP21B)抗體免疫試劑盒

聚生殼菌心肌病相關(guān)蛋白2Human NEK2(Serine/threonine-protein kinase Nek2) ELISA Kit人色P450c21A/21-羥化(CYP21A)免疫試劑盒

球孢白僵菌5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框34抗體Human HBeAg(hepatitis B virus E Antigen) ELISA Kit人色P450(CYP450)免疫試劑盒

釀酒酵母E1A激活基因激蛋白1抗體Human HBeAb(hepatitis B virus E Antibody) ELISA Kit人色c氧化亞基VIB多肽1(廣泛存在)(COX6B1)免疫試劑盒

根瘤菌2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框42抗體Human NEK2(Serine/threonine-protein kinase Nek2) ELISA Kit人色c氧化亞基5B,線粒體(COX5B)免疫試劑盒

松口蘑豬瘟病抗體Human EZH2(Enhancer of zeste homolog 2) ELISA Kit人色c氧化亞基5A,線粒體(COX5A)免疫試劑盒

斑玉蕈3號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框54抗體Human HBcAb(hepatitis B virus Core antibody) ELISA Kit人色c氧化Ⅵα亞基多肽1(COX6A1)免疫試劑盒

醬油曲霉2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框43抗體Human τPK1(Tau-Protein Kinase) ELISA Kit人色C氧化(COX)免疫試劑盒

釀酒酵母豬瘟病抗體Human VEGF165(Vascular Endothelial Growth Factor165) ELISA Kit人色C-1(CYC1)免疫試劑盒

蝦苗殺蝦微桿菌中心體蛋白110抗體Human VEGF-B(Vascular Endothelial Cell Growth Factor B) ELISA Kit人色b561(cytb561)免疫試劑盒

果生鏈核盤(pán)菌纖維Human VASPIN(Visceral Adipose Specific Serine Protease Inhibitor) ELISA Kit人絨毛蛋白/埃茲蛋白(cytovillin/ezrin)免疫試劑盒

根瘤菌分裂周期蛋白14B抗體Human VEGF-D(Vascular Endothelial Growth Factor D) ELISA Kit人膜DNA抗體(cmDNA)免疫試劑盒

食淀粉乳桿菌1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框177抗體Human VIL1(Villin 1) ELISA Kit人角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)免疫試劑盒

冷海水黃桿菌1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框183抗體Human WARS(Tryptophanyl tRNA Synthetase) ELISA Kit人角蛋白18-M65（CK 18-M65）免疫試劑盒

厚垣孢普可亞菌Pochonia│chlamydospora 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRDNA基轉(zhuǎn)移3A試劑盒狗牙花堿D

黃暗青霉Penicillium│citreonigrum 質(zhì)量規(guī)格：>98%，BCDNA基轉(zhuǎn)移1試劑盒高車前

瓊氏不動(dòng)桿菌Acinetobacter│junii 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BPDnaJ同源亞科B成員1試劑盒廣防風(fēng)苷A
苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)試劑GFAP(Human glial fibrillary acidic protein) ELISA Kit  人神經(jīng)膠質(zhì)纖維suan性蛋白規(guī)格： 48T

15-LO/LOX(Human 15-lipoxygenase) ELISA Kit  人15脂加氧mei規(guī)格： 48T

CETP(Human glial fibrillary acidic protein) ELISA Kit  人酯轉(zhuǎn)移蛋白規(guī)格： 48T

LTC4(Human Leukotriene C4) ELISA Kit  人白三烯C4規(guī)格： 48T

Cyt-C(Human Cytochrome-C) ELISA Kit  人細(xì)胞色suC規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。