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產品分類：免疫組化

儲存條件：室溫,12個月  

用途：蛋白A-瓊脂糖進行單克隆抗體的純化

注意事項：主要由0.05mol/L乙酸鈉、0.15mol/L氯化鈉組成,乙酸調pH4.3。

 

 

配制與標定的實驗原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑，基準試劑的預處理：稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標線，搖勻。

 

 

實驗方法與判定：

1.對照品溶液的穩(wěn)定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應不低于10000。

4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內穩(wěn)定可靠。

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豇豆慢生根瘤菌I類組織相容性H-2抗原D-Dalpha鏈抗體Human SP2 ELISA Kit大鼠二單酰脫羧(MLYCD)免疫試劑盒

橙色桿狀菌HEAT重復內含蛋白5A蛋白抗體Human SODD/BAG4 ELISA Kit大鼠二單酰(malonyl CoA)免疫試劑盒

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草木樨中華根瘤菌羥類固脫氫17β抗體（17β-HSD8）Human AQPEP(Aminopeptidase Q) ELISA Kit大鼠基轉移(ALT)免疫試劑盒

牧草紅酵母透明質結合蛋白4抗體Human Sodium iodide symporter ELISA Kit大鼠別孕烯/3α,5α-四氫孕(AP/3α,5α-THP)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌A型流感病H5N1凝集抗體Human SORBS2 ELISA Kit大鼠表皮生長因子受體(EGFR)免疫試劑盒

光滑青霉A型流感病核衣殼蛋白抗體Human SNRPD3 ELISA Kit大鼠表皮生長因子(EGF)免疫試劑盒

土曲霉原變種A型流感病核衣殼蛋白抗體Human ACTN3(Alpha-actinin-3) ELISA Kit大鼠胞外銅鋅超氧化物歧化(Cu/Zn-SOD/SOD3)免疫試劑盒

秀珍菇A型流感病核衣殼蛋白抗體Human SP2 ELISA Kit大鼠胞漿型磷脂A2(cPLA2)免疫試劑盒

耶爾森氏菌屬B型流感病蛋白抗體Human SOX12 ELISA Kit大鼠膀胱腫瘤抗原(BTA)免疫試劑盒

腸道致病性大腸埃希氏菌人類狀瘤病16-E7抗體Human SNX7 ELISA Kit大鼠半胱蛋白抑制劑/胱抑C(Cys-C)免疫試劑盒

亞羅酵母屬跨膜蛋白絲1抗體Human SOAT2 ELISA Kit大鼠白血病抑制因子受體(LIFR)免疫試劑盒

肺癌癌基因蛋白3抗體Human SOCS5 ELISA Kit大鼠白血病抑制因子(LIF)免疫試劑盒

AS1.251資源名稱: 枯草芽孢桿菌 質量規(guī)格：分析標準品草質

史氏芽孢桿菌Bacillus│smithii 質量規(guī)格：分析標準品,≥98.0%(HPLC)百蕊草I

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質量規(guī)格：分析標準品,99.8%（GC)硫金雀花堿
乙酸緩沖液EL ELISA Kit  大鼠內皮脂肪mei規(guī)格： 48T

CA ELISA Kit  大鼠碳suan酐mei規(guī)格： 48T

CGRP ELISA Kit  大鼠降鈣su基因相關肽規(guī)格： 48T

MTL ELISA Kit  大鼠胃動su規(guī)格： 48T

Beta-EP ELISA Kit  大鼠β內啡肽規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現(xiàn)，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉染細胞的篩選

1）  轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。