詳細介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
公司專業供應的抗體,抗體是用于化學反應、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產品品質,價格實惠,多種規格供應,售后完善。
產品名稱 | 核DNA結合蛋白C1D抗體 |
英文名稱 | C1D |
規格 | 0.1ml |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術:
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
(二)準備
1.試劑
經親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應損傷蛋白質,可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯)胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。
周期素依賴性激酶5(CDK5)煙色毛霉拉丁屬名: Mucor fumosus
激肽釋放酶10(KLK 10)嗜熱鏈球菌拉丁屬名: Streptococcus thermophilus
酯酶Cγ鏈(PLCγ1) Aquibacillus halophilus拉丁屬名: Aquibacillus halophilus
神經氨酸酶(NA) 角鱗灰鵝膏菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
酯酰肌特異性酯酶C(PIPLC) 鐮孢菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
酪氨酸激酶2(Tyk-2) 泡囊短波單胞菌拉丁屬名: Brevundimonas vesicularis
白介素1β轉換酶(ICE) 溜曲霉拉丁屬名: Aspergillus tamarii
整合素連接激酶1(ILK-1) 酵母菌拉丁屬名: Saccharomyces sp.
細胞色素P450c21B/21-羥化酶(CYP21B) 緊密青霉拉丁屬名: Penicillium compactum
細胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A) 枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus subtilis
末端脫氧核苷酸轉移酶(TdT) 葡萄座腔菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO) 釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
脾臟酪氨酸激酶(Syk) 單色革蓋菌用途: 藥用菌、科研
絲氨酸/蘇氨酸蛋白酸酶(STK) 鹽古桿菌拉丁屬名: Halobacterium sp.
白介素受體相關激酶(IRAK) 蒂莫內馬賽菌拉丁屬名: Massilia timonae
酸烯式酮酸羧激酶(PCK)黑芝注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
核DNA結合蛋白C1D抗體21號染色體開放閱讀框56抗體4-Prenyloxyresveratrol中文名:別名:分子式:C19H20O4
中性粒細胞殺菌蛋白BP30抗體2,3-Dihydro-12,13-dihydroxyeuparin中文名:別名:分子式:C13H16O5
Cappucci蛋白抗體Obolactone中文名:別名:分子式:C19H18O4
前列腺素過氧化物合成酶3抗體Euparin中文名:澤蘭素別名:分子式:C13H12O3
補體因子H相關蛋白1抗體Gamycin I中文名:別名:分子式:C21H26O4