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ELISA試劑盒特異性與非特異性著色的區(qū)分
閱讀：915 發(fā)布時間：2017-1-6小鼠ELISA試劑盒切片染色后背景太深，如何區(qū)分特異性與非特異性著色？
全片著色是指整個切片全都染上了顏色，著色的強度可深可淺，總之，分不清那些組織是陽性那些組織是陰性。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因有：
1.抗體濃度過高：一抗?jié)舛冗^高是常見的原因之一。解決辦法是，每次使用新抗體前應當對其工作濃度進行測試，使每一抗體個體化，找到適合自己實驗室的理想工作濃度，既使是即用型的抗體也應如此，不能只簡單的按說明書進行染色。
2.抗體孵育時間過長或溫度較高：解決辦法是，嚴格執(zhí)行操作規(guī)程，隨身佩帶報時表或報時鐘，及時提醒，避免因遺忘而造成時間延長。現(xiàn)在流行的二步法（Polymer）敏感性很高，要求一抗孵育的時間不是傳統(tǒng)的1小時，而是30分鐘，因此，要根據(jù)染色結(jié)果進行調(diào)整。
3.切片在緩沖液或修復液中浸泡時間太長（大于24小時）：原因上不清楚，但現(xiàn)象存在。有的實驗室喜歡前一天將切片脫蠟至修復，第二天加抗體進行免疫組化染色，如果將裝有切片和修復液的容器放在4ºC冰箱隔夜，對結(jié)果無明顯影響，如果放在室溫，特別是炎熱的夏天，會出現(xiàn)背景著色，因此，不可存放時間太長。
4.一抗變質(zhì)、質(zhì)量差的多克隆抗體：注意抗體的有效期，過期的抗體要麼不顯色要麼背景著色。用新買的抗體時設(shè)立陽性對照和用使用過的抗體作比較。
5.DAB變質(zhì)和顯色時間太長：DAB現(xiàn)用現(xiàn)配，如有沉渣應進行過濾后再用。配制好的DAB不應存放時間太長，因為在沒有酶的情況下，過氧化氫也會游離出氧原子與DAB產(chǎn)生反應而降低DAB的效力，未用完的DAB存放在冰箱里幾天后再用這種似乎節(jié)約的辦法是不可取的。DAB的顯色在顯微鏡下監(jiān)控，達到理想的染色程度時立即終止反應。不過當染色片太多時或用染色機時，這樣做似乎不現(xiàn)實，但至少應對一些新的或少用的抗體顯色時進行監(jiān)控，避免顯色時間過長。
6.組織變干：修復液溢出后未及時補充液體、染色切片太多、動作太慢、忘記滴液、滴液流失等都是造成組織變干的原因。解決的辦法是操作要認真仔細，采用DAKO筆或PAP Pen在組織周圍畫圈，可以有效的避免液體流失，也能提高操作速度。小鼠ELISA試劑盒
1,3-二氨基-2-羥基丙烷 一氯環(huán)戊烷 四十四烷
1-溴二十二烷 二苯基二甲氧基硅烷 (S)-2-氨基辛烷
甲基環(huán)己基二甲氧基硅烷 苯硅烷 (R)-2-氨基辛烷
1,3-雙(3-氨基丙基)-1,1,3,3-四甲基二硅氧烷 N-(2-羥乙基)吡咯烷 1,1-二氟乙烷
1,3二氯-1,1,3,3-四異丙基二硅氧烷 1-溴-2-氟乙烷 三氯氟甲烷
十甲基環(huán)五硅氧烷 6-溴-1,4-苯并惡烷 3-氨基丙基二甲基甲氧硅烷
2-甲基-4-丙基-1,3-氧硫雜環(huán)己烷 2,2-雙(3-氨基-4-羥基苯基)六氟丙烷 N-氨基繞丹寧
2,2-二甲基噻唑烷 1-Boc-3-碘氮雜環(huán)丁烷 2,2,4,4-四甲基戊烷
1-溴-2-甲基丁烷 6'-二乙氨基-2'-二芐氨基熒烷 1,1,3,3-四甲基二硅氧烷
四甲基二乙烯基二硅氧烷 1-Boc-3-氨甲基氮雜環(huán)丁烷 四甲基二硅氮烷
碘甲基*基硅烷 N-[(4-氨基苯基)-甲基磺酰基]吡咯烷 六甲基乙烷
N-(2-氯乙基)吡咯烷 1,3,5-*基-1,3,5-三(3,3,3-三氟丙基)環(huán)三硅噁烷 四(*基硅基)硅烷
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