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除蟲菊酯檢測試劑盒的合成方法
閱讀：1085 發布時間：2014-2-26除蟲菊酯檢測試劑盒由美國abraxis合成，這一項試劑的研究為生物領域帶來了另一類新篇章 。以下是除蟲菊酯檢測試劑盒的原理，操作步驟，及其注意事項，讓我們來看看除蟲菊酯檢測試劑盒是怎么合成的吧。
適用
Abraxis合成除蟲菊酯檢測試劑盒適用于定量檢測水樣中（底下水，表面水，井水）芐氯菊脂和相關的合成除蟲菊酯（見后面的交叉反應表）。水樣的前處理步驟請看說明書。如果要檢測土壤，作物，和食品樣品的話請本公司索取相關資料。
原理
Abraxis合成除蟲菊酯檢測試劑盒應用了酶聯免疫檢測原理測定芐氯菊脂和相關的合成除蟲菊酯。測試樣品和包被有合成除蟲菊酯特異性抗體的磁性顆粒一起加入到一次性測試管中孵育20分鐘。然后添加合成除蟲菊酯酶結合物。樣品中的合成除蟲菊酯和合成除蟲菊酯酶結合物相互競爭于磁性顆粒上的抗體結合位點。孵育30分鐘，在反應中磁場應用于固定測試管中的順磁顆粒（指結合合成除蟲菊酯和酶標芐氯菊脂復合物的磁性顆粒，和它們的初始濃度成正比），同時允許把沒有結合的試劑處理掉。在倒掉沒有發生反應的試劑后用洗液清洗這些顆粒。通過添加酶底物（過氧化氫）和顯色劑（TMB）可以檢測到合成除蟲菊酯。結合到合成除蟲菊酯抗體上的芐氯菊脂酶標物催化底物/顯色液混合物產了有色物質。經過30分鐘的孵育，加入酸溶液終止穩定反應。因為酶標芐氯菊脂（結合物）和沒有標記的合成除蟲菊酯（樣品）在反應中競爭于抗體位點結合，所以顯色的深淺和樣品中合成除蟲菊酯的濃度成反比。
試劑盒組成
1、包被有合成除蟲菊酯抗體的磁性顆粒。
合成除蟲菊酯抗體（抗芐氯菊脂單克隆抗體）被包被于磁性顆粒上，這些顆粒懸浮于包含有保護劑和穩定劑的鹽性緩沖液中。100測試，1瓶60mL。
2、合成除蟲菊酯酶結合物。
HRP標記的芐氯菊脂類似物被稀釋在包含有保存劑和穩定劑的鹽性緩沖液中。100測試，1瓶30mL。
3、芐氯菊脂標準品
5瓶芐氯菊脂標準品（0.75、2.5、5.0、15.0 ppb)，每瓶2.0 mL，保存于含有保護劑和穩定劑的甲醇溶液中。
4、對照 1瓶2ml
濃度為3.0 ppb 的芐氯菊脂，保存于含有保護劑和穩定劑的甲醇溶液中。
5、稀釋劑/零標準
含有保護劑和穩定劑的甲醇溶液，不含有任何可以檢測到的芐氯菊脂。100檢測，1瓶35mL。
6、顯色溶液
含有過氧化氫和TMB的有機堿溶液。100檢測，1瓶65mL。
7、終止液
0.5%的稀硫酸溶液，100檢測，1瓶60 mL。
8、洗液
加防腐劑的無離子水，100檢測，1瓶250 mL
9、測試管
測試管，每包36支，100檢測，共3包。
測試步驟
在操作之前一定要仔細閱讀以上內容。
1、對于水樣可以直接按此說明書處理，如果是其它樣品顆粒請我公司索取特定的樣品處理方法。
2、標記測試管，使標準、樣品和對照區分開。
管號 1、2 3,4 5,6 7,8 9,10 11 12 13 14
測試管內容物 Diluent/Zero Standard,
0 ppb Standard1
0.75 ppb Standard2
2.5 ppb Standard3
5.0 ppb Standard4
15.0 ppb Control Sample1 Sample2 Sampe3
3、在對應的測試管中加入250 uL標準，對照或樣品。
4、混勻包被有合成除蟲菊酯抗體的磁性顆粒溶液，然后每個測試管加入500 uL。
5、渦旋震蕩1到2秒，盡量不要產生氣泡。
6、在室溫下孵育20分。
7、在每個測試管加入250 uL合成除蟲菊酯酶結合物。
8、渦旋震蕩1到2秒，盡量不要產生氣泡。
9、在室溫下孵育30分。
10、在磁性分離架分離2分鐘。
11、用同樣的操作手法輕輕倒出所有測試管中的液體，并輕輕地把剩余液體吸取干凈。
12、每個測試管中加入1 mL洗液，渦旋震蕩1到2秒，再在磁性分離器上分離2分鐘。
13、從分離器上拿起支架，慢慢翻轉來傾倒測試管中的液體，動作一定要平緩保證液體是沿著試管的一邊持續的流出。一直到支架反了過來的時候放在吸水墊上面使試管壁上的水被吸出。提起來支架然后再放到吸水墊上面，反復操作幾次確保試管壁上的液體全部被移除。
14、重復步驟12，13 一次。
15、從分離器上拿下支架，然后每個測試管中加入500 uL的顯色液。
16、渦旋震蕩1到2秒，盡量不要產生氣泡。
17、在室溫下孵育30分。
18、在每個測試管中加入500 uL的終止液。
19、在一個干凈的測試管中加入1 mL洗液，作為步驟20中的空白。
20、在加入終止液15分鐘后，在450nm的分光光度計測定。
結果
手工計算
1、 計算每個標準的吸光度值。
2、 計算每個標準的%B/Bo（每個標準的吸光度值除以 稀釋劑/零標準 的吸光度值）。
3、 以每個標準的%B/Bo值的Log 為Y軸，合成除蟲菊酯濃度的Ln為X軸作圖繪制標準曲線。
4、 把樣品或對照的%B/Bo插入到標準曲線就可以計算出結果。