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如何選擇適合自己實驗的抗體呢?
閱讀:1504 發布時間:2018-8-2 八月悄無聲息的來了,八月的風,已經不那么的輕柔,而帶有無言的煩躁,甚至裹著疼痛的雨。當我們在實驗時,需要選擇的產品來確保實驗的準確無誤,那在實驗中,我們應該如何正確的去選擇抗體呢?
抗體品種繁復,品牌眾多,技術參數紛歧,價格和質量更是相差甚大,怎么購買到高質量價格適宜的抗體,并地做出我們想要的成果,其中有許多細節需求留意。今天恒遠就給大家支招。
一、一抗的挑選
1.斷定抗體的姓名,留意中英文姓名、它名、亞型等信息。
2.斷定您的試驗類型,Elisa,WB,IHC,ICC,仍是FACS。一般抗體的闡明書都會列出該抗體經驗證過適用于何種試驗的類型,假如抗體闡明書沒有提及的使用類型,并不意味著該抗體不適用于此種剖析使用類型,而僅是闡明尚未經過此種試驗驗證,請依據闡明書列出的已驗證的類型來挑選適宜您試驗的抗體。
3.斷定試驗樣本的種屬,Human,Mouse,仍是Rat。一般抗體闡明書都列出該抗體經試驗驗證過適用于何種物種試驗,請依據闡明書列出已驗證的種屬來挑選適宜您試驗的抗體。
4.樣本蛋白的結構性質。了解樣本蛋白的結構性質有助于挑選zui適宜的抗體,待測樣本蛋白的結構域和樣本在提取和處理過程中是否會變性,蛋白空間構象的改動,會影響抗體的免疫親和反響。
5.單多克隆抗體的挑選。市面上的抗體仍是以多克隆抗體為主,一般單克隆抗體特異性強,但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強,靈敏度高,但易呈現非特異性染色(能夠經過封閉等避免)。
二、二抗的挑選
1.種屬來歷。首要依據一抗種屬來歷來決議購買二抗來歷,如一抗是小鼠來歷,那二抗就買抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
2.符號物的挑選。有HRP、Biotin、熒光素等符號物。一般SP三步法二抗挑選Biotin符號的二抗,以與后邊的SP結合反響,而免疫熒光染色就需求購買不同熒光素符號的二抗,如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。
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