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生化試劑干擾原因及交叉污染該怎么辦?
閱讀：3016 發(fā)布時間：2018-5-30 全自動生化分析儀由于其清洗系統(tǒng)的工作模式所致，常出現(xiàn)一個項目對緊隨其后的一個甚至幾個項目的測定帶來一定程度的試劑污染，并隨著儀器使用時間的累加，儀器狀況的下降，試劑交叉污染的程度會有所增加。在實際工作中主要表現(xiàn)為某一項目的測定結(jié)果一直符合實驗要求，可是一段時間以后測定結(jié)果趨高，并且日益明顯；而單獨測定該項目時測值又合理起來，給日常工作帶來極大的不便。因此避免試劑間的干擾非常重要。
試劑間的干擾原因：
試劑中含有下一測試所要測定的底物，或是含有的某種試劑成分與下一反應(yīng)所要測定的底物有作用，因而直接干擾下一反應(yīng)的測定結(jié)果；
該試劑所引導(dǎo)的反應(yīng)對下一項目的反應(yīng)進程帶來了間接的干擾，因為在有試劑污染的情況下，下一項目所測定的是前后兩個項目反應(yīng)的綜合作用結(jié)果。下面通過對試劑成分的分析和相應(yīng)試驗來找出試劑交叉污染可能帶來的情況，進而指導(dǎo)相應(yīng)的項目調(diào)整和結(jié)果分析。
試劑間可能發(fā)生的干擾情況：
ALT（IFCC）、AST（IFCC）試劑中含有高活力LD成分，有可能會對LD的測定帶來干擾；
ALP（IFCC）、CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）、CO2（PEPC）、α-Amy(EPS)等試劑中使用磷酸緩沖液，可能會對其后的Mg2+測定帶來干擾；
ChE(Butyrylthiocholine)、TC(ChOD-PAP)、Glu(GOD-PAP)、UA(Uricase)、α-HBDH(DGKC)等試劑使用磷酸緩沖液，可能會對無機磷的測定帶來干擾；
CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）試劑中含有Glu成分，其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反應(yīng)過程，因此可能對Glu測定帶來干擾，尤其對Glu的HK法測定可能帶來嚴重干擾；
Mg2+試劑(Calmagite)中含有EGTA成分，為Ca2+絡(luò)合劑，可能對Ca2+的測定帶來干擾；
個別試劑以甘油做酶的保護劑，因此可能對TG的測定帶來干擾，等等；
低密度脂蛋白、甘油三酯、膽固醇的試劑成分中都含有CE、CHOD、POD酶，都會與血清成分反應(yīng)，生成的中間反應(yīng)產(chǎn)物是H2O2濃度,因為低密度脂蛋白和甘油三酯檢測單位都是mmol/L級,而尿酸檢測單位是μmol/L級,二者之間相差1 000倍,故檢測尿酸的反應(yīng)杯中只要殘留極少量的低密度脂蛋白和膽固醇試劑就可產(chǎn)生大量的H2O2,直接導(dǎo)致尿酸的檢測結(jié)果的升高；
葡萄糖對尿酸試劑的干擾GLU(OX)與UA測定原理均采用Trider's反應(yīng)方法,試劑探針殘留攜帶的GLU帶入到UA反應(yīng)體系,發(fā)生血糖反應(yīng)其產(chǎn)物紅色醌亞胺與UA產(chǎn)物紅色醌亞胺顏色疊加,而血清中正常血糖含量遠高于尿酸水平,從而導(dǎo)致UA結(jié)果嚴重偏高；
膽固醇(TC)、甘油三醋(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL)會對總膽汁酸檢測的影響，導(dǎo)致膽汁酸測定值增加。這些試劑中為了保證反應(yīng)充分，往往含有膽酸鈉成分或是一些脂類水解促進劑等，這些物質(zhì)導(dǎo)致了樣本膽汁酸測定的攜帶性增高及內(nèi)源產(chǎn)物等副反應(yīng)性增高；
谷丙中的含有的酮戊二酸NADH反應(yīng)體系會干擾總膽汁酸檢測中的Thio-NAD－Thio-NADH循環(huán)指示體系，導(dǎo)致測定值偏低；
由于各個試劑公司所提供的產(chǎn)品說明書常不能全面反映試劑的組成情況，所以通過實驗發(fā)現(xiàn)試劑交叉污染可能帶來的干擾變得很重要。
下面以兩個試驗來加以說明:
A、將試劑作為樣本進行全套項目測定，根據(jù)結(jié)果確定發(fā)生試劑交叉污染時造成直接干擾的項目。
B、將一份樣本分為兩份，一份加生理鹽水或其他適當(dāng)?shù)南♂屢海硪环菁拥攘康脑噭瑫r測定、考察結(jié)果的變化，進而確定可能發(fā)生試劑交叉污染時造成干擾的項目。進行這一實驗時，使用半自動生化分析儀可能會得到更為理想的結(jié)果，尤其是針對雙試劑反應(yīng)時，R1、R2加入時機可以得到更為的控制。
此外，由于試劑成分的復(fù)雜多樣性，實時儀器狀況的*性，可能發(fā)生的試劑間的交叉污染的情況不盡相同。
試劑間的交叉污染會影響結(jié)果的準確性，因此隔絕二者間的非常重要。一般在安排項目順序時要求兩個項目間至少要有一個非干擾項目，而zui*的做法則是將被干擾項目置于干擾項目之前以消除干擾。同時要求檢驗人員對儀器的工作狀態(tài)要了如指掌，并在一個樣本的項目選擇或一個樣本的zui后一項與下一樣本的*個項目選擇時對于試劑交叉污染的可能性加以考慮，合理安排項目順序，以便得到更為合理的結(jié)果。
通常情況下可以按照以下順序安排項目：ALT、AST、ALP、γ–GT、ChE、TP、Alb、TBIL、DBIL、Urea、UA、Cr、CK、CK-MB、α–HBDH、LD、Glu、TG、TC、HDL-C、LDL-C、ApoAI、ApoB、α–Amy、CO2、P3-、Fe3+、Ca2+、Mg2+。
實際工作中，用全自動生化分析儀進行連續(xù)的多個項目的測定，每個反應(yīng)的詳細過程難以探知，因此理論分析結(jié)合實際應(yīng)用方可摸索出符合本單位工作的方法。
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