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通過與mRNAs在特異位點的結(jié)合，切割靶位點或抑制轉(zhuǎn)錄（翻譯），MicroRNAs可調(diào)控基因表達。MiRNA與靶的相互作用是由RNA誘導的沉默復合體（RISC）介導的。RISC介導的成熟miRNA與位點相互作用依賴于miRNA和靶位點的序列互補性以及在3 ' UTR結(jié)合位點的總數(shù)量。 許多重要的調(diào)節(jié)基因受miRNAs調(diào)控，如Ers受let-7，Bcl-2受miR15和miR16，ERs 受miR206，TPM1受miR-21和PTEN受miR-19a調(diào)控。基于細胞分析方法的熒光素酶報告載體常用于監(jiān)測受miRNAs調(diào)控的基因。
A. 優(yōu)點:
功能性檢測——是一種功能性的分析方法，用于監(jiān)測細胞內(nèi)miRNA介導的靶基因的調(diào)控
可定量分析——miRNAs介導的調(diào)控可以通過熒光素酶基因的表達進行定量監(jiān)測
可構(gòu)建穩(wěn)定細胞系——載體可用于構(gòu)建表達報告基因的穩(wěn)定細胞系
B. 原理：
        pLuc-3UTR報告載體是一系列基于熒光素酶報告的構(gòu)建體，用于監(jiān)測miRNA介導的細胞內(nèi)靶基因調(diào)控。每個載體含有CMV啟動子、熒光素酶基因、3 ' UTR 靶基因和SV40終止子序列。MiRNA的表達并與3 ' UTR結(jié)合，導致熒光素酶基因表達的抑制。因此miRNA介導的特異靶的調(diào)控可通過熒光素酶活性進行監(jiān)測。比較二個樣本熒光素酶活性，可解析調(diào)控，明確差異。