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已證明敲除效率的siRNA:
在預設計siRNA產品中,用熒光定量PCR方法進行驗證實際沉默率
每個靶基因可提供2條已驗證的siRNA
提供實時定量PCR引物,可以用SYBR Green熒光染料進行實時定量PCR檢測敲除效率
當病毒基因、人工轉入基因、轉座子等外源性基因隨機整合到宿主細胞基因組內,并利用宿主細胞進行轉錄時,宿主細胞常產生一些dsRNA。宿主細胞胞質中的核酸內切酶Dicer將dsRNA切割成多個具有特定長度和結構的小片段RNA(大約21~23 bp),即siRNA。siRNA在細胞內RNA解旋酶的作用下解鏈成正義鏈和反義鏈,繼之由反義siRNA再與體內一些酶(包括內切酶、外切酶、解旋酶等)結合形成RNA誘導的沉默復合物(RNA-induced silencing complex,RISC)。RISC與外源性基因表達的mRNA的同源區進行特異性結合,RISC具有核酸酶的功能,在結合部位切割mRNA,切割位點即是與siRNA中反義鏈互補結合的兩端。被切割后的斷裂mRNA隨即降解,從而誘發宿主細胞針對這些mRNA的降解反應。在正常生物體內,RNA干擾起到抗病毒、抑制基因過量表達的作用。
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