二氧化碳培養箱廣泛應用于生命科學細胞培養研究,典型的應用領域包括醫學、免疫學、遺傳學、微生物、農業科學、藥物學的研究和生產,其通過在培養箱箱體內模擬形成一個類似細胞/組織在生物體內的生長環境如恒定的酸堿度(pH值:7.2-7.4)、穩定的溫度(37°C)、較高的相對濕度(95%),來對細胞/組織進行體外培養的一種裝置。
用戶對培養箱都有兩條zui基本的要求,一是要求培養箱能夠對溫度、濕度和二氧化碳濃度等提供zui穩定的控制,以便于其研究工作的進展;二是要求培養箱能夠對培養箱內的微生物污染進行有效的防范,并且能夠定期消除污染,以保護研究成果,防止樣品損失。
一、溫度控制
氣套式加熱和水套式加熱,兩種加熱系統都是和可靠的,同時它們都有著各自的優點和缺點。水套式加熱是通過一個獨立的水套層包圍內部的箱體來維持溫度恒定的,其優點:水是一種很好的絕熱物質,當遇到斷電的時候,水套式系統就可以比較長時間的保持培養箱內的溫度準確性和穩定性(維持溫度恒定的時間是氣套式系統的3-4倍),有利于實驗環境不太穩定(如有用電限制,或者經常停電)的用戶選用。氣套式加熱是通過遍布箱體氣套層內的加熱器直接對內箱體進行加熱的,又叫六面直接加熱。氣套式與水套式相比,具有加熱快,溫度的恢復比水套式培養箱迅速的特點,特別有利于需要箱門頻繁開關的培養。此外,對于使用者來說氣套式設計比水套式更簡單化(水套式需要對水箱進行加水、清空和清洗,并要監控水箱運作的情況)。
二、CO2濃度的控制:
目前市面箱體,二氧化碳濃度的控制方式,主要通過紅外傳感器(IR)或熱導傳感器(TCD)進行測量,通過內置微電腦的調節,實現對箱體內二氧化碳濃度的監控。兩種傳感器都是準確的,但都各有優缺點。熱導傳感器監控CO2濃度的工作原理是基于對內腔空氣熱導率的連續測量,輸入CO2氣體的低熱導率會使腔內空氣的熱導率發生變化,這樣就會產生一個與CO2濃度直接成正比的電信號。紅外傳感器(IR)它是通過一個光學傳感器來檢測CO2的水平。IR系統包括一個紅外發射器和一個傳感器,當箱體內的CO2吸收了發射器發射的部分紅外線之后,傳感器就可以檢測出紅外線的減少量,而被吸收紅外線的量正好對應于箱體內CO2的水平,從而可以得出箱體內CO2的濃度。由于IR系統是通過紅外線減少來確定箱內CO2濃度,而箱體內顆粒物能夠反射或部分吸收紅外線,使得IR系統對箱體內顆粒物的多少比較敏感,因此IR傳感器應用在含空氣過濾器的培養箱內比較合適。
三、相對濕度:
箱內濕度對于培養工作來說是一項非常重要然而又經常被忽略的因素。維持足夠的濕度水平并且要有足夠快的濕度恢復速度(如在開關門后)才能保證不會由于過度干燥而導致培養失敗。用戶在選購培養箱的時候盡量選擇濕度揮發快的,具備引流風道,更好的保證箱體內快速達到zui大相對飽和濕度并且開關門后的濕度恢復的時間快速。BLLA直熱式二氧化碳培養箱底部無加熱水盤,內膽采用斜膽式設計,內膽底部直接儲水,加濕用水直接倒入內膽底部,這樣的話加濕用水與底部加熱體接觸面加大,同時濕氣蒸發面積也加大了,保證了培養箱內濕度的快速恢復;另內膽采用斜膽式設計,可以控制冷凝水的流動方向,大大減少冷凝水在玻璃門上結露的機會。
四、防污染設計和消毒滅菌系統:
污染是導致細胞培養失敗的一個主要因素,因而,培養箱的制造商們設計了多種不同的裝置去減少和防止污染的發生,其主要途徑都是盡量減少微生物可以生長的區域和表面,并結合自動排除污染裝置來有效防止污染的產生。如帶有高溫濕熱滅菌、UV消毒、干熱滅菌等功能的培養箱,可實現培養箱意外污染后的滅菌;另箱體內部如有設計安裝了ULPA過濾器,能過濾培養箱內空氣,可過濾除去99.999%的0.12微米以上的顆粒;此外,如箱體外部具有抗菌涂層,可以有效的抑制微生物在箱體表面的滋生。這些裝置對于細胞培養來說是*,那么對于培養箱來說,具有怎樣的消毒方式更適合呢?
首先,我們考慮的當然是各種方式的滅菌能力,紫外消毒能力是與紫外燈距離目標的距離的二次方成反比,距離越遠,消毒能力越差,所以紫外消毒方式有其局限性,難以達到*滅菌的要求;相比較而言,高溫消毒是目前比較有效消毒滅菌的方法,高溫消毒又分為兩類,一是傳統的高溫干熱消毒,另一種是先進的高溫濕熱滅菌。接下來我們重點說一下高溫干熱和高溫濕熱兩種方法的優劣。高溫濕熱由于蒸汽潛熱大,穿透力強,容易使蛋白質變性或凝固,因此該法的滅菌效率比干熱滅菌法高。其原因有三:①蛋白質凝固所需的溫度與其含水量有關,含水量愈大,發生凝固所需的溫度愈低。濕熱滅菌的菌體蛋白質吸收水分,所以較同一溫度的干熱空氣中易于凝固。②濕熱滅菌過程中蒸汽放出大量潛熱,加速提高濕度。因而濕熱滅菌比干熱所需溫度低,如在同一溫度下,則濕熱滅菌所需時間比干熱短。③濕熱的穿透力比干熱大,使其深部也能達到滅菌溫度,故濕熱比干熱收效好一些。所以高溫消毒并不是簡單的看消毒溫度,主要是看是否濕熱消毒。BLLA直熱式二氧化碳培養箱采用90℃高溫濕熱滅菌,可有效地消滅幾乎所有微生物污染源。
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