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免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）的原理及操作
點(diǎn)擊次數(shù)：2558 發(fā)布時(shí)間：2011-5-19
【原理】
免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的原理是：把組織中的特異分子作為抗原，用各種在顯微鏡下可見的標(biāo)記物標(biāo)記特異抗體或標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物，使特異的免疫化學(xué)反應(yīng)具有可見性，從而間接地顯示抗原，達(dá)到在細(xì)胞或細(xì)胞器水平定位特異分子的目的。
【步驟】
SP法的基本步驟
1. 石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水
2. 3％的過氧化氫去離子水孵育5-10min，消除內(nèi)原性過氧化物酶。蒸餾水沖洗。
3. 抗原修復(fù)：微波熱修復(fù)，取一定量的0.01M檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）于微波盒中，微波加熱至沸騰將脫蠟水化后的切片放入已沸騰的緩沖液中，中繼續(xù)處理10~15 min取出微波盒，冷卻至室溫取出玻片。先用蒸餾水洗2次，后用PBS洗5min。
0.01M檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）：檸檬酸三鈉 3g，檸檬酸 0.4g，加蒸餾水至1000ml。
4. 封閉：滴加正常山羊血清封閉液室溫10~20 min甩去多余液體，勿洗
5. 滴加適當(dāng)稀釋的一抗，37℃ 2-3h或4℃過夜。
6. PBS沖洗，3分鐘×3次
7. 滴加生物素化二抗，37℃孵育10-15min。
8. PBS沖洗，3分鐘×3次
9. 滴加辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素，室溫或37℃孵育10-15min
10. PBS沖洗，3分鐘×3次
11. AEC/DAB顯色
12. 蒸餾水反復(fù)洗滌后，甘油明膠封片。甘油明膠：明膠 40g、甘油 250ml、蒸餾水 210ml、石炭酸 5ml，混勻，過濾。
13. 顯微圖象分析：取處理組和對照組各2張免疫組織化學(xué)的玻片，每張玻片隨機(jī)取5個(gè)視野，OLYMPUS IX70倒置顯微鏡下觀察，KODAK數(shù)碼相機(jī)拍照記錄。捷達(dá)形態(tài)學(xué)圖象分析系統(tǒng)分析記錄圖片的總IOD值。