色譜法是實驗室非常重要和常用的分析方法,由于色譜法可以連續濃縮、分離、純化和測定樣品,它已成為每個分析人員常用的分析和測試方法,并已廣泛應用于各個行業。可以說,只要有分析任務,就用色譜分析。
在色譜操作過程中,為了維護高純硅膠色譜柱,需要注意以下幾個問題。
1、避免壓力和溫度的急劇變化以及任何機械振動。溫度的突然變化或從高處墜落都會影響柱內的填充情況;柱壓的突然升高或降低也會對柱內的填料產生沖擊,因此應緩慢調節流速,進樣時閥門轉動不宜過慢。
2、溶劑的組成應逐漸改變,尤其是反相色譜。不應直接由有機溶劑改為全水,反之亦然。
3、一般來說,不能反沖。只有在生產廠家表明可以反沖的情況下,才能通過反沖去除殘留在柱頭的雜質。否則,反沖會迅速降低柱效。
4、選擇使用合適的流動相(尤其是pH),避免破壞固定相。有時可以在進樣器前面連接一個預柱。分析柱為鍵合硅膠時,前置柱為硅膠,可以使流動相在進入分析柱前被硅膠“飽和”,避免硅膠基質在分析柱中溶解。
5、避免將基質復雜的樣品,尤其是生物樣品直接注入。需要對樣品進行預處理或在進樣器和色譜柱之間連接保護柱。保護柱通常是填充有類似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經常更換。
6、經常用強溶劑清洗,以除去柱內殘留的雜質。清洗時,對流路徑系統中流動相的更換應逐漸用可混溶的溶劑轉移,每個流動相的體積應為柱體積的20倍左右,即常規分析需要50~75ml。
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