色譜柱的發展,經歷了從不定型硅膠到高純球型硅膠、從低pH條件下不穩定到穩定的過程。但硅膠在高pH條件下極度不穩定的問題,始終沒有很好的解決方案,直到雜化顆粒的誕生。雜化顆粒集合了有機和無機填料的優點,既具有純硅膠填料的高柱效、高機械強度及保留穩定性能,又具有聚合物填料的寬pH范圍穩定性和抑制硅醇基的酸性的特性,使其在堿性流動相中也能游刃有余。
與傳統硅膠顆粒色譜柱相比,雜化顆粒色譜柱具有耐受堿性流動相的特點。傳統C18硅膠顆粒色譜柱推薦的流動相pH為8,這是因為在高pH條件下,硅膠填料開始溶解,鍵合相也會水解(反應機理為:在堿性條件下,OH-親核進攻硅膠基質,發生親核取代反應,導致硅膠溶解及鍵合相的水解),導致柱效下降。而雜化顆粒因嵌入硅甲基,親核取代反應放緩,顆粒表面溶解速度明顯放緩,所以色譜柱壽命大大延長。
傳統的C18硅膠色譜柱在分析堿性化合物時,峰形有時候會很糟糕,這是因為硅醇基與堿性化合物存在離子交換作用,導致拖尾,雖然一些色譜柱采用封端這一方法來改善拖尾,但是封端不可能*進行,還是會有殘留硅醇基,拖尾在所難免。而雜化顆粒在合成之時就引入硅甲基,從根源上減少了硅醇基,所以雜化顆粒酸性的降低使其在寬pH范圍內為堿性化合物帶來了對稱的峰形。在方法開發的流動相pH優化階段,雜化顆粒色譜柱可為不同pKa值酸性和堿性的混合分析物的分離提供了更寬的選擇面。
當緩沖鹽流動相的pH由3.75提高到10.0時,雜化顆粒色譜柱可以使一些堿性分析物的柱容量提高20倍或更高。在低pH條件時,堿性分析物處于質子化的狀態,離子間的相互排斥影響其與固定相的吸附,所以對堿性分析物來說,柱容量有限。而本產品由于可以使用堿性流動相,由此可以提高柱容量,這對堿性分析物的色譜制備具有重大意義。
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