氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位,是生物、衛(wèi)生、農(nóng)牧業(yè)、食品、飲料及飼料等行業(yè)生產(chǎn)和科研中的分析測試項目,并且隨著相關(guān)行業(yè)標準的制定和完善,氨基酸的定性和定量分析將成為企業(yè)的檢測項目。
由于氨基酸種類較多,結(jié)構(gòu)接近,沒有紫外或熒光響應,使得氨基酸分析一直是高效液相色譜領(lǐng)域較難解決的問題之一。針對國內(nèi)科研與生產(chǎn)單位的實際需要,開發(fā)了氨基酸分析色譜柱。
氨基酸分析色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù),填料技術(shù)自不待言,填料的好壞對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術(shù)也沒有想象中的這么簡單,不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長度,裝柱工藝都有所不同,要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床,更多是一門藝術(shù),需要經(jīng)驗積累。
高效液相色譜分析中,氨基酸分析色譜柱的選擇直接影響了分離效果的好壞,選擇合適的產(chǎn)品可以縮短方法開發(fā)所需的時間,并且使方法更具穩(wěn)定性。分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱;對于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱,以改善峰形,延長其使用壽命等。
拿到一根新柱的時候應該怎樣進行活化及維護?為什么要這樣做?
新柱活化,實際上是一個平衡的過程,除了用流動相平衡外,有時候還必須用所測樣品對新柱進行平衡,特別是測定分子量比較高的多肽,尤其重要。因為分子量高的物質(zhì)分子,擴散速度慢,平衡所需時間也相應較長。
具體平衡方式也很簡單,多進幾次樣品,直到峰面積和保留時間穩(wěn)定,再進行正式進樣測定。如果要加快平衡時間,把前面用來平衡的進樣樣品濃度加大,或者不等洗脫完成,連續(xù)進樣多針。用待測物對新柱平衡,目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點的吸附能力飽和掉。
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