技術(shù)文章
IL-4抗CD23單抗檢測法
閱讀:1080 發(fā)布時間:2012-5-26IL-4能促進B細胞膜表面CD23分子表達,一些BurkittB淋巴細胞瘤株(如Jijoy細胞)未受刺激時,CD23表達水平很低,經(jīng)IL-4刺激后,CD23的表達呈劑量依賴性增加。用抗CD23單抗間接免疫熒光法染色,可檢測人IL-4活性。
(1)將5X105/mL的Jiioy細胞培養(yǎng)于含10%FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液中。
(2)取對數(shù)生長期細胞,用新鮮培養(yǎng)液將細胞配成5X 105/mL,接種于24孔板中,lmL/孔。分別加待測標本及標準IL-4(不同稀釋度),并設(shè)陰性對照,培養(yǎng)48~72h。
(3)洗細胞2次,以106—107/mL濃度的細胞重懸于含1%BSA,2mmoL/L疊氮鈉的PBS中。將細胞轉(zhuǎn)人Falcon分析管中,離心棄PBS,加100~L抗CD23單抗(5—10btS/mL),置冰浴中15~30rain,用上述PBS洗2次。
(4)加適當稀釋的FITC標記的羊抗鼠IgC,置冰浴15~30rain,同上洗細胞,重懸細胞于含2mmol/mL疊氮鈉的PBS中。
(5)用流式細胞儀分析CD23分子的表達,以陽性細胞百分率表示,并計算IL-4活性單位;或用熒光顯微鏡觀察CD23分子的表達。