ClonePix 2高通量細(xì)胞克隆篩選系統(tǒng)

ClonePix 2高通量細(xì)胞克隆篩選系統(tǒng)全自動(dòng)的篩選流程可以在更短時(shí)間內(nèi)篩選更多克隆。經(jīng)過(guò)已有用戶證明，可以顯著提高篩選效率、克隆產(chǎn)量，并節(jié)省時(shí)間和成本。

主要特性：

1.更短時(shí)間篩選更多克隆

2.優(yōu)質(zhì)圖像結(jié)合智能化分析軟件

3.準(zhǔn)確、自動(dòng)化克隆挑選，避免有限稀釋,

4.增加生物治療藥物細(xì)胞系的產(chǎn)量

創(chuàng)新的篩選流程更少時(shí)間篩選更多克隆

縮短細(xì)胞系和抗體開(kāi)發(fā)時(shí)間

挑取表達(dá)水平更優(yōu)的細(xì)胞克隆

1.使用半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，獲得獨(dú)立的單個(gè)細(xì)胞克隆

2.可以快速篩選上萬(wàn)個(gè)克隆

 - 大大增加找到更優(yōu)克隆的概率

 - 白光成像用于識(shí)別克隆位置

 - 熒光成像用于定量表達(dá)水平

3.多種檢測(cè)方法可選

 - 不用標(biāo)記，直接檢測(cè)雜交瘤分泌的 IgG 或抗原特異性 MAbs

 - 檢測(cè)加入標(biāo)記的重組蛋白或表達(dá)的熒光標(biāo)記蛋白

4.客觀的成像分析，使用戶可以準(zhǔn)確篩選到更優(yōu)表達(dá)水平的克隆，并盡可能早的排除表達(dá)水平低的干擾克隆

5.根據(jù)克隆表達(dá)水平自動(dòng)排序，并準(zhǔn)確、自動(dòng)化挑取克隆，避免有限稀釋的繁瑣和出錯(cuò)幾率。

滿足藥品監(jiān)管的要求

針對(duì)人 IgG 的項(xiàng)目，使用不含動(dòng)物源成份的試劑：CloneMedia，CloneMatrix，Recombinant CloneDetect 以及 XP media。

確保形成獨(dú)立的單克隆

使用 CloneMedia 半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，有利于增加鋪板效率和形成獨(dú)立單個(gè)克隆，有利于克隆識(shí)別和挑取。

1.基于多種基礎(chǔ)培養(yǎng)基，針對(duì) ClonePix 系統(tǒng)的應(yīng)用進(jìn)行專門(mén)優(yōu)化

2.適用于多種細(xì)胞，經(jīng)過(guò)優(yōu)化和驗(yàn)證的培養(yǎng)基可選：Per.C6，CHO-s，CHO DG44，HEK，CHOK1SV，雜交瘤以及骨髓瘤細(xì)胞等

3.有標(biāo)準(zhǔn)成份，無(wú)動(dòng)物源成份以及無(wú)谷氨酰胺成份等多種培養(yǎng)基可選,

4.使用 CloneMatrix 甲基纖維素濃縮液，用戶自己配制特殊用途培養(yǎng)基

CloneMedia 培養(yǎng)基獲得的克隆，使用 CloneSelect Imager 成像

不同于傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法，半固體培養(yǎng)基的細(xì)胞鋪板密度更高，并且可以保證形成獨(dú)立的單個(gè)克隆，有利于下一步單克隆的挑取。

一個(gè)成熟的培養(yǎng)方法

使用半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞形成克隆，這種方法已經(jīng)非常完善：

“EASIER TO PLATE OUT LARGE NUMBERS OF CELLS AND TO RECOVER MANY INDEPENDENT HYBRIDOMA CLONES”

A simple, single-step technique for selecting and cloning hybridomas for the production of monoclonal antibodies (J. Immun. Methods (1982) 50, 161-171)

目標(biāo)蛋白檢測(cè)

使用基于熒光的方法檢測(cè)分泌蛋白

熒光耦聯(lián)的 CloneDetect 檢測(cè)試劑可以原位檢測(cè)分泌表達(dá)的人、小鼠以及大鼠抗體。因?yàn)榭寺”旧聿恍枰a(chǎn)生熒光，所以不需要對(duì)目標(biāo)蛋白加入額外熒光標(biāo)記分子。

1.根據(jù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)要求以及表達(dá)蛋白類型，選擇合適的檢測(cè)試劑，比如 FITC 標(biāo)記抗人檢測(cè)試劑

2.加入液體檢測(cè)試劑到半固體培養(yǎng)基

3.對(duì)克隆進(jìn)行成像、分析并根據(jù)所有克隆的熒光信號(hào)水平進(jìn)行排序

檢測(cè)方法的選擇

檢測(cè)分泌 IgG 的單克隆抗體

高質(zhì)量成像，智能化分析

成像

1.白光和熒光成像可以用于計(jì)算克隆的大小以及熒光強(qiáng)度（代表目標(biāo)蛋白的表達(dá)量）。

數(shù)據(jù)顯示

1.軟件根據(jù)克隆的熒光強(qiáng)度、大小等物理參數(shù)對(duì)克隆自動(dòng)進(jìn)行排序，得到所有克隆的 2D 柱狀圖表。

2.克隆的篩選和選取主要依據(jù)以下參數(shù)：

- 大小，邊緣圓度以及克隆距離

- 根據(jù)熒光強(qiáng)度排序

- 用戶可以通過(guò)軟件中設(shè)置“proximity”的值，去掉距離太近的克隆

數(shù)據(jù)追蹤

1.軟件自動(dòng)將所有克隆的統(tǒng)計(jì)信息排列成表，可以隨時(shí)導(dǎo)出想要克隆的信息

2.軟件按照用戶自定義的順序挑取克隆到 96 孔板，并自動(dòng)記錄克隆來(lái)源、位置信息以及熒光強(qiáng)度等統(tǒng)計(jì)學(xué)參數(shù)

克隆挑取和轉(zhuǎn)移

1.用戶可以根據(jù)成像數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析的結(jié)果自定義要挑取的克隆數(shù)目和挑取順序

2.系統(tǒng)自動(dòng)選擇用戶自定義的克隆，并將每個(gè)克隆轉(zhuǎn)移到 96 孔目標(biāo)微孔板，用于培養(yǎng)后進(jìn)一步分析或克隆擴(kuò)大培養(yǎng)

3.XP Medi a CHO Growth A 是針對(duì) CloneMedi a CHO Growth A 半固體培養(yǎng)基專門(mén)優(yōu)化，適用于挑取克隆進(jìn)一步放大培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基，可以獲得更好的挑取后生長(zhǎng)效果。

快速篩選特異性抗體克隆

ClonePix 系統(tǒng)可以從融合后自動(dòng)化篩選，一步找到目標(biāo)雜交瘤克隆；是一個(gè)高效的自動(dòng)化篩選方法。

1.篩選更多克隆——發(fā)現(xiàn)更多的陽(yáng)性克隆

2.實(shí)驗(yàn)過(guò)程更加快速高效，e.g.7-10 天可以篩選到 100-500 個(gè)特異性雜交瘤克隆

3.通過(guò)避免陽(yáng)性克隆的丟失以及早期排除陰性克隆，大大節(jié)省下游工作時(shí)間和成本

4.原位篩選抗原特異性或者分泌 IgG 雜交瘤——適用于多種類型抗原分子（從 160 KD 的復(fù)合體蛋白到 2.6 KD 的磷酸肽）

快速檢測(cè)抗原特異性IgG克隆

FITC 標(biāo)記 60 KD 抗原

快速?gòu)耐嘶寺≈泻Y選高產(chǎn)克隆

一些雜交瘤細(xì)胞系在 MAb 的產(chǎn)量方面退化嚴(yán)重，或者分泌性比較差。已有用戶使用 ClonePix 系統(tǒng)從退化的克隆中成功恢復(fù)了高產(chǎn)克隆株。

增加生物藥物細(xì)胞系的產(chǎn)量

ClonePix 系統(tǒng)相比傳統(tǒng)方法，可以在短時(shí)間內(nèi)篩選更多的克隆，能夠大大增加找到稀少的高產(chǎn)克隆的概率。通過(guò)下面的實(shí)例 (MedImmune LLC)，比較了傳統(tǒng)的有限稀釋和 ClonePix系統(tǒng)的有效性。

更短時(shí)間篩選更多克隆

原位熒光顯示高產(chǎn)細(xì)胞株，早期排除不需要的克隆

在工藝進(jìn)一步優(yōu)化前即獲得高產(chǎn)克隆 (NS/O: 4-5 g/L，CHO: 5-6 g/L)

細(xì)胞系穩(wěn)定性

表達(dá)量不穩(wěn)定是細(xì)胞系篩選早期階段的主要問(wèn)題。ClonePix 系統(tǒng)可以直觀分析克隆的穩(wěn)定性。

把篩選到的克隆鋪到半固體培養(yǎng)基，4-7 天培養(yǎng)后，使用 ClonePix 進(jìn)行成像分析，比較子代克隆和親代克隆的表達(dá)量，驗(yàn)證克隆穩(wěn)定性。也可以培養(yǎng) 7-14 天后，重新對(duì)亞克隆進(jìn)行篩選。

經(jīng)過(guò)兩輪篩選之后穩(wěn)定性細(xì)胞系數(shù)據(jù)