培安有限公司
【ISCO泵】高壓液相色譜法
檢測(cè)樣品:汽油
檢測(cè)項(xiàng)目:液相色譜法
方案概述:本文介紹了高效液相色譜(HPLC)和超高效液相色譜(UHPLC)的基本概念、流動(dòng)相輸送系統(tǒng)的類(lèi)型、柱類(lèi)型及組件、以及泵的選擇。文章詳細(xì)討論了VanDeemter方程及其對(duì)分離效率的影響,并比較了不同類(lèi)型的泵在高壓和高精度需求下的性能。
一、介紹
高壓液相色譜(HPLC)是分析化學(xué)和生物化學(xué)中常用的一種方法,用于將混合物中的化合物進(jìn)行分離,以便進(jìn)一步分析和純化。
在HPLC過(guò)程中,混合物中的組分通過(guò)被泵送的溶劑(稱(chēng)為流動(dòng)相)穿過(guò)裝有硅基顆粒的柱子(稱(chēng)為固定相)來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。每種組分(稱(chēng)為分析物)根據(jù)其在流動(dòng)相和固定相之間的獨(dú)牛寺親和力,以不同的速度沿柱遷移,并在不同的時(shí)間從柱中流出,從而實(shí)現(xiàn)混合物的有效分離。
對(duì)流動(dòng)相具有較高親和力的分析物會(huì)沿著柱子遷移得更快,而對(duì)固定相具有較高親和力的分析物則遷移得更慢。這種遷移時(shí)間(稱(chēng)為保留時(shí)間)對(duì)于每個(gè)分析物都是獨(dú)牛寺的,可以用于其鑒定。通過(guò)在柱后適當(dāng)使用檢測(cè)方法,每個(gè)分析物也可以被定量分析。
較小的柱填料顆粒尺寸可以提高色譜分辨率,但需要增加溶劑輸送壓力。進(jìn)一步減小柱填料顆粒尺寸可以允許更高的溶劑流速,從而在不犧牲分辨率的情況下減少分析時(shí)間。這正是超高效液相色譜(UHPLC)相對(duì)于其他液相色譜技術(shù)的優(yōu)勢(shì)所在。
基本類(lèi)型的高效液相色譜柱化學(xué):
• 正相色譜,例如硅膠顆粒
• 反相色譜,例如涂有C-18的硅膠
基本的流動(dòng)相輸送系統(tǒng)類(lèi)型:
• 等度洗脫 - 使用恒定溶劑混合物,例如在整個(gè)分離過(guò)程中使用10%的水在甲醇中。
• 梯度洗脫 - 隨時(shí)間變化的溶劑混合物,例如從純己烷開(kāi)始,然后逐漸增加乙酸乙酯的濃度,直到最后為純乙酸乙酯。
高效液相色譜系統(tǒng)的基本組件包括溶劑輸送泵、樣品進(jìn)樣口、柱子和檢測(cè)器。高效液相色譜的性能要求儀器具有典型液相色譜系統(tǒng)所不具備的特性。溶劑輸送必須是無(wú)脈沖的,并且在1毫升/分鐘到100微升/分鐘的流量范圍內(nèi)準(zhǔn)確校準(zhǔn)。
注射泵通常被認(rèn)為優(yōu)于活塞泵,適用于需要低且穩(wěn)定流速的高效液相色譜應(yīng)用。Teledyne ISCO注射泵是這些高性能應(yīng)用的優(yōu)秀高效液相色譜泵。
圖1:等度溶劑輸送系統(tǒng)
二、理論
Van Deemter方程是理解色譜法基本原理的關(guān)鍵。根據(jù)Van Deemter方程:
H = A + B/µ + Cµ
其中:H是柱子的板高,µ是流動(dòng)相的線性流速。A、B和C是常數(shù)。較小的板高H表示更高的分離分辨率。2
常數(shù)A是渦流擴(kuò)散項(xiàng)。渦流擴(kuò)散是由于柱中多條流動(dòng)路徑導(dǎo)致的,并且與流動(dòng)相流速無(wú)關(guān)。由于填料顆粒的存在,分析物分子可以沿著不同長(zhǎng)度的多條路徑前進(jìn)。這些不同長(zhǎng)度的多重路徑使分析物分子分散開(kāi)來(lái),并導(dǎo)致峰展寬。A項(xiàng)取決于固定相的緊密程度。固定相中的空隙會(huì)因通道效應(yīng)導(dǎo)致峰展寬。相比之下,較小的填料顆粒提供更小的路徑長(zhǎng)度差異,從而減少峰展寬。
B是縱向擴(kuò)散系數(shù)。它依賴(lài)于分析物分子在流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)。更快的流動(dòng)相流速減少了停留時(shí)間,而分析物分子在柱中的較短停留時(shí)間減少了縱向擴(kuò)散的影響。這種減少有助于提高分離效率,因?yàn)榉治鑫锓肿油ㄟ^(guò)擴(kuò)散散開(kāi)的機(jī)會(huì)更少,這解釋了1/v因子。
C是分析物質(zhì)量傳遞系數(shù)。它取決于分析物分子在移動(dòng)相和固定相之間達(dá)到平衡所需的時(shí)間。如果這種平衡太慢,那么一些未能及時(shí)與固定相結(jié)合的分析物分子將會(huì)隨流動(dòng)相流下柱;而那些未能及時(shí)從固定相脫離的其他分子則被留下。更高的流動(dòng)相流速會(huì)導(dǎo)致分析物分子的擴(kuò)散,因此解釋了v因子。較小的固定相顆粒預(yù)計(jì)會(huì)有更短的平衡時(shí)間。
如上所述,較小的固定相顆粒或珠子應(yīng)該會(huì)降低A和C值。A項(xiàng)對(duì)H的貢獻(xiàn)較小,允許更高的分辨率。隨著C項(xiàng)對(duì)H值的影響變得不那么顯著,增加流動(dòng)相流速不會(huì)太多犧牲分離性能。這將允許在相同的分辨率下進(jìn)行更快的分離。盡管較小的柱珠可能不會(huì)直接影響B值,但較高的流速減少了其對(duì)H的貢獻(xiàn)。較小的柱珠將允許在更高分辨率下進(jìn)行更快的分離。3
較小的珠子將以較小的間隙填充,從而減小A值,但提供更高的溶劑流動(dòng)阻力。反過(guò)來(lái),這需要更高的溶劑壓力。隨著蕞優(yōu)分離流速的增加,柱背壓隨固定相顆粒尺寸的立方成反比增加;即P∝1/d³。4通常,對(duì)于5 µm柱珠的HPLC需要1,000 psi的壓力,而對(duì)于1.7 µm柱珠的UHPLC則需要20,000 psi或更高的壓力。1,4
圖2:梯度溶劑輸送系統(tǒng)
三、HPLC泵
往復(fù)式泵通常配有單活塞或雙活塞。活塞掃過(guò)的體積通常較小,約為100 µL。由于體積小,需要頻繁補(bǔ)充液體,導(dǎo)致周期性壓力下降。雙活塞泵比單活塞泵產(chǎn)生更平穩(wěn)的流動(dòng),但并非總是理想的選擇。注射泵蕞適合要求高壓、無(wú)脈沖和精確流動(dòng)的高性能應(yīng)用。注射泵具有更大的缸體容積,高達(dá)1 L,并且在運(yùn)行期間通常不需要重新填充。因此,基線更加穩(wěn)定,沒(méi)有周期性的壓力下降。理想的泵應(yīng)能夠在等度或梯度模式下操作。
表1:常用推薦的HPLC泵
四、引用
1) Y. Shen and R.D. Smith, Electrophoresis 23 (2002) pp. 3106-3124.
2) D.A. Skoog and D.M. West, Fundamentals of Analytical Chemistry, 3rd edit., pp. 643-649.
3) D. Sievers, M.E. Swartz and B.J. Murphy, G.I.T. Laboratory Journal 5(2004) pp.43-45.(2004) pp. 503-504
4) L.A. Colon, J.M. Cintron, J.A. Anspach, A.M. Fermier and K.A. Swin-ney, The Analyst 129
5) L.R. Snyder, J.J. Kirkland and J.L. Glajch, Practical HPLC Method Development, 2nd edit., pp. 41-43.
6) J.C. Giddings, Dynamics of Chromatography: Part I Principles and Theory (Marcel Dekker, Inc., New York: 1965) pp. 25-26, 229-230.
7) J.M. Cintron and L.A. Colon, The Analyst 127 (2002) pp. 701-704.A.D. Jerkovich, J.S. Mellors and J.W. Jorgenson, LCGC 21 (July 2003) pp. 600-611.
相關(guān)產(chǎn)品清單
溫馨提示:
1.本網(wǎng)展示的解決方案僅供學(xué)習(xí)、研究之用,版權(quán)歸屬此方案的提供者,未經(jīng)授權(quán),不得轉(zhuǎn)載、發(fā)行、匯編或網(wǎng)絡(luò)傳播等。
2.如您有上述相關(guān)需求,請(qǐng)務(wù)必先獲得方案提供者的授權(quán)。
3.此解決方案為企業(yè)發(fā)布,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由上傳企業(yè)負(fù)責(zé),化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
最新解決方案
- GCMS法測(cè)定塑料中四溴雙酚A含量
- 科技衛(wèi)士,守護(hù)每一刻笑容 | 譜育科技HS/GC-MS助力精準(zhǔn)篩查牙膏中的二噁烷
- 利用紅外光譜法檢測(cè)吩噻嗪副產(chǎn)物高復(fù)合物中吩噻嗪的含量
- 使用NexION 5000 SP-ICP-MS分析半導(dǎo)體級(jí)硫酸中的金屬納米顆粒
- 氣相色譜法測(cè)定工業(yè)用丙二醇甲醚乙酸酯含量
- 氣相色譜法測(cè)定工業(yè)用異丙醇含量
- 高低溫環(huán)境試驗(yàn)箱在化妝品實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用實(shí)踐
- Xtimate Sugar-H測(cè)定有機(jī)酸中草酸和泛解酸鈉含量
- Xtimate Sugar-H測(cè)定堿液中甲酸乙醇乙酸丙醇含量
- Xtimate Sugar-H測(cè)定草酸鈉含量
該企業(yè)的其他方案
- 【CEM】干糧和濕糧寵物食品制造商的骨含量分析
- 【CEM】通過(guò)微波輔助環(huán)閉合復(fù)分解反應(yīng)實(shí)現(xiàn)碳?xì)滏I合肽的自動(dòng)化合成
- 【CEM】營(yíng)養(yǎng)飲料中膳食成分的快速測(cè)定
- 【CEM】使用少量酸進(jìn)行大型嬰兒食品樣品的消解與分析
- 【ISCO】RediSep® 反相 C18、C18Aq 和C8色譜柱使用、清潔及存儲(chǔ)指南
- 【ISCO】反相RediSep®柱在肽分離中的應(yīng)用與優(yōu)化
- 【CEM】從黃瓜、番茄和青椒中提取農(nóng)藥
- 【HANSON】阿昔洛韋霜5%(Zovirax, US)的體外滲透研究(IVPT)
- 【CEM】微波輔助的肽棕櫚酰化:提高合成效率的新策略
- 【CEM】大型混合食品樣品的微波消解:不同重量樣品的處理
業(yè)界頭條
- ICIE2025國(guó)際(廣州)涂料工業(yè)展線下宣傳推
-
2025廣州國(guó)際涂料工業(yè)展(簡(jiǎn)稱(chēng)“ICIE”)的籌備工作正在如火如荼地進(jìn)行中,為了確保展會(huì)的順利進(jìn)行...
- 中石化凝膠滲透色譜儀中標(biāo)結(jié)果公告
- 新規(guī)出臺(tái)!《規(guī)范工業(yè)有機(jī)廢氣活性炭治理技術(shù)》征求意見(jiàn)稿發(fā)布
- 高溫差示掃描量熱儀中標(biāo)結(jié)果公告
- 2024年在線色譜儀中標(biāo)結(jié)果公告
- 山東省精細(xì)化工產(chǎn)業(yè)征求意見(jiàn)稿發(fā)布:到2027年,營(yíng)業(yè)收入年均增長(zhǎng)8%,突破9000億元
- 提供更智能、高效的實(shí)驗(yàn)室管理方案 耀客明道攜核心產(chǎn)品亮相高博會(huì)
- 行星式球磨機(jī)中標(biāo)結(jié)果公告