l 細(xì)胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細(xì)胞來源

國家資源庫

l 細(xì)胞背景

從 1978 年復(fù)發(fā)的急性單核細(xì)胞白血病 (AML) 的 1 歲男孩的外周血中建立。該細(xì)胞可以吞噬乳汁珠和激活的紅細(xì)胞，無表面和胞質(zhì)免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化。

注意：NRAS 突變在 PubMed= 9379676 中被錯誤地指示為p.Gly12Ser。

l 細(xì)胞特性

1） 來源：急性單核細(xì)胞白血病，單核細(xì)胞

2） 形態(tài)：單核細(xì)胞，懸浮

3） 含量：>1x106 細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用

l 培養(yǎng)條件

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640（推薦awcell-0002）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；0.05 mM β－qiu基乙醇(細(xì)胞培養(yǎng)級 推薦：awcell-8211)；雙抗，1%。

2） 參考傳代比例：傳代時控制細(xì)胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在細(xì)胞生長至8-10 ×105cell / mL時進(jìn)行傳代。

3） 參考換液頻率：傳代時換液。

4） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

5） 凍存液：*培養(yǎng)液95%，DMSO 5%（使用該凍存液后，按照我?guī)斓慕?jīng)驗復(fù)蘇存活率約50%，復(fù)蘇后需要額外培養(yǎng)7-10天才能恢復(fù)生長）

l 注意事項

【注意事項】：

該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，根據(jù)培養(yǎng)經(jīng)驗以及客戶的反饋，傳代時使用【半換液法】對細(xì)胞狀態(tài)較為有利，因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進(jìn)行傳代。

1. 您在收到我們提供的用15ml離心管發(fā)貨的細(xì)胞后，請不要通過離心的方式收集細(xì)胞，可以先準(zhǔn)備兩個新的T25培養(yǎng)瓶，然后將細(xì)胞混合均勻后移入兩個新的T25培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加培養(yǎng)基到10ml。放入到37℃培養(yǎng)箱中。

2. 您在收到的是用T25培養(yǎng)瓶發(fā)貨的細(xì)胞，請先通過離心的方式收集細(xì)胞，然后將細(xì)胞重懸加入12ml按照說明書要求配置的*培養(yǎng)基吹打均勻后移入兩個新的T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)即可。

3. thp-1懸浮細(xì)胞。該細(xì)胞在培養(yǎng)時更喜歡溫和處理，培養(yǎng)時盡量少對細(xì)胞進(jìn)行離心處理以此造成對細(xì)胞的傷害。換液時不要全培養(yǎng)基更換，建議您使用【半換液法】進(jìn)行傳代，添加細(xì)胞培養(yǎng)基以稀釋細(xì)胞至維持密度即可。

4. 細(xì)胞對血清質(zhì)量較為敏感，我?guī)旖ㄗh您使用進(jìn)口品牌優(yōu)質(zhì)血清進(jìn)行培養(yǎng)。FBS不要滅活，如果細(xì)胞生長緩慢請嘗試使用其他FBS或暫時將FBS濃度增加到20%

5.該細(xì)胞的培養(yǎng)液中需添加β-qiu基乙醇（細(xì)胞培養(yǎng)級別），若不添加，可能會對細(xì)胞狀態(tài)造成影響。

β-qiu基乙醇的穩(wěn)定性有限，不可將β-qiu基乙醇添加到*培養(yǎng)基中長期儲存，在每次傳代或液體添加時再添加β-巰基乙醇。

β-qiu基乙醇（2-qiu基乙醇）被添加到淋巴細(xì)胞或其他細(xì)胞培養(yǎng)物中，因為在培養(yǎng)基中使用的FBS中氨基酸半胱氨酸供不應(yīng)求，而胱氨酸則很多。有些細(xì)胞（例如T細(xì)胞）無法將半胱氨酸轉(zhuǎn)運到細(xì)胞質(zhì)中，必須將其轉(zhuǎn)化為半胱氨酸。β-qiu基乙醇將胱氨酸還原為可被細(xì)胞轉(zhuǎn)運的形式，然后轉(zhuǎn)化為細(xì)胞生長所需的半胱氨酸。  β-qiu基乙醇還是一種還原劑，可以分解培養(yǎng)中細(xì)胞產(chǎn)生的許多有毒代謝產(chǎn)物，從而改善細(xì)胞周圍的環(huán)境。

6.該細(xì)胞對細(xì)胞密度較為敏感，培養(yǎng)、傳代時請注意保持細(xì)胞密度在合適的范圍（具體請參考細(xì)胞說明書）。

7..該細(xì)胞凍存后復(fù)蘇率較低，凍存時請酌情提高細(xì)胞量

8.通常情況下可以通過向正在生長的細(xì)胞中添加*培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長，每7天可以將細(xì)胞離心并重懸于新配的培養(yǎng)基中，來完成細(xì)胞的全換液。

ATCC有關(guān)thp-1細(xì)胞保持細(xì)胞活力的說明

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（頻繁的細(xì)胞計數(shù)是監(jiān)測thp-1的最佳方法。這些細(xì)胞應(yīng)該每2至3天通過向燒瓶中簡單加入少量新鮮培養(yǎng)基（使它們具有條件培養(yǎng)基）來培養(yǎng)。您不需要每次都離心細(xì)胞并重新傳代。當(dāng)在我們的實驗室中培養(yǎng)時，到第2天，細(xì)胞通常可以擴(kuò)增到具有更多培養(yǎng)基的更大的燒瓶中。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到8×10 5個活細(xì)胞/ ml時需要進(jìn)行傳代。不允許細(xì)胞密度超過1×10（6）活細(xì)胞/ ml。）

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10?S的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。

4）運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

l 運輸形式

低溫:（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

常溫: （2） T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。