60210ES 嘌呤霉素鹽酸鹽
參考價 | ¥398.00 |
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌Yeasen/翌圣生物
- 型號60210ES
- 所在地上海市
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時間2023/9/21 10:59:49
- 訪問次數(shù) 273
25 mg | 398.00元 | 300 件可售 |
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,制藥 |
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產(chǎn)品簡介
嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑鏈霉菌(Streptomyces alboniger)發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死革蘭氏陽性菌,各種動物和昆蟲細胞。某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。作用機制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3′末端的類似物,能夠與核糖體的A位點結(jié)合并摻入到延伸的肽鏈中。嘌呤霉素同A位點結(jié)合后,不會參與隨后的任何反應,從而導致蛋白質(zhì)合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素產(chǎn)生菌Streptomyces alboniger內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(PAC),賦予機體對嘌呤霉素產(chǎn)生抗性。這一特性如今普遍應用于篩選特定攜帶pac基因質(zhì)粒的哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。
嘌呤霉素在細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選中的普遍應用與慢病毒載體的特性有關,現(xiàn)在商業(yè)化的慢病毒載體多數(shù)都攜帶pac基因。在某些特定情況下,嘌呤霉素亦可以用來篩選轉(zhuǎn)化攜帶pac基因質(zhì)粒的大腸桿菌菌株。
產(chǎn)品信息
貨號 | 60210ES25/60210ES60/60210ES72/60210ES76/60210ES80 |
規(guī)格 | 25 mg/100 mg/250 mg/500 mg/1 g |
CAS號(CAS NO.) | 58-58-2 |
分子式(Molecular Fomular) | C22H29N7O5·2HCl |
分子量(Molecular Weight) | 544.43 g/mol |
純度(Purity) | ≥98% |
外觀(Appearance) | 白色至米白色粉末 |
結(jié)構(Structure) |
組分信息
組分名稱 | 60210ES25 | 60210ES60 | 60210ES72 | 60210ES76 | 60210ES80 |
規(guī)格 | 25 mg | 100 mg | 250 mg | 500 mg | 1 g |
儲存條件
-25~-15℃保存,有效期2年。
使用說明
1. 建議使用濃度
哺乳動物細胞:1-10 μg/mL,最佳濃度需要殺滅曲線來確定。
大腸桿菌:LB瓊脂培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)化pac基因的大腸桿菌,使用濃度為125 μg/mL。
【注】:使用嘌呤霉素篩選大腸桿菌穩(wěn)轉(zhuǎn)株需要精確的pH值調(diào)節(jié),而且受宿主細胞本身的影響。
2.溶解方法
用蒸餾水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/mL的母液,經(jīng)0.22 μm濾膜過濾除菌后分裝于-25~-15℃凍存;也可溶于甲醇,配制成10 mg/mL的儲存液。
3. 嘌呤霉素殺滅曲線的確定(以shRNA轉(zhuǎn)染或者慢病毒轉(zhuǎn)導為例)
嘌呤霉素有效篩選濃度跟細胞類型、生長狀態(tài)、細胞密度、細胞代謝情況及細胞所處細胞周期位置等有關。為了篩選到穩(wěn)定表達的shRNA細胞株,確定殺死未轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導細胞的濃度嘌呤霉素至關重要。建議初次做實驗的客戶一定要建立適合自身實驗體系的殺死曲線(kill curve)。
1)Day 1:24孔板內(nèi)以5~8×104 cells/孔的密度鋪板,鋪足夠量的孔以進行后續(xù)的梯度實驗。37℃細胞孵育過夜。
2)Day 2:①準備篩選培養(yǎng)基:含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基(如0-15 μg/mL,至少5個梯度);②往孵育過夜后的細胞內(nèi)更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基;之后37℃孵育細胞。
3)Day 4:更換新鮮的篩選培養(yǎng)基,并觀察細胞存活率。
4)根據(jù)細胞的生長狀態(tài),約2-3天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基。
5)每日監(jiān)測細胞,觀察存活細胞率,從而確定抗生素篩選開始4-6天內(nèi)有效殺死非轉(zhuǎn)染或所有非轉(zhuǎn)導細胞的藥物濃度。
4. 哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的篩選
等轉(zhuǎn)染含有pac基因的質(zhì)粒后,細胞在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中增殖,以篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子。
1)細胞轉(zhuǎn)染48 h后,將細胞(原樣或稀釋)置于含有適當濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
【注】:當細胞處于分裂活躍期時,抗生素作用。細胞過于密集,抗生素產(chǎn)生的效力會明顯下降。最好進行細胞分盤使其密度不超過25%。
2)每隔2-3天,移除和更換含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基。
3)篩選7天后評估細胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時間,這依賴于宿主細胞系和轉(zhuǎn)染篩選效率。
【注】:每日進行細胞生長狀態(tài)的觀察。嘌呤霉素的篩選至少需要48 h,有效濃度嘌呤霉素的篩選周期一般在3-10天。
4)轉(zhuǎn)移和放置5-10個抗性克隆到一個35 mm的培養(yǎng)皿中,用選擇培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7天。此次富集培養(yǎng)是為日后的細胞毒性實驗做準備。
注意事項
1.嘌呤霉素為有毒化合物,操作時請小心拿放。
2.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
3.本產(chǎn)品僅用于科研用途,禁止用于人身上。